关于细胞冻存的一个问题，不知大家平时有没有留心过？标题留长一些，欢迎大家热烈讨论

deron

昨天犯了一个很严重的错误，在分离出血液的单个核细胞以后，装入冻存管中放进4℃冰箱，结果忘记放入-80℃冰箱，直到今天早上整理试剂时才发现，这时已经过了18h。此时冻存管中的细胞已经沉到底部，冻存液中也有类似溶血的现象出现。2 M+ d5 m$ ^8 u+ T' I# ~
想请教大家，这样的细胞活性还会有多少？6 n' _# X" P6 i1 X0 q/ G( I

$ G4 M9 |- `- \. @: J今天早上上网查阅了相关资料，发现在冻存的4℃平衡这一步，大致有：' F0 r( S  Y- L( Y1 \4 s
1.4℃平衡半小时，投入-80℃冰箱
6 ]: l9 H* [% g; N. Q2 `0 d2.直接用冷的冻存液悬浮细胞，投入-80℃冰箱) F& N6 f1 Q3 _  {- X3 m9 M
3.4℃、-20℃、-80℃……不赘述
; V' H3 {/ e8 d! O4.4℃过夜，投入-80℃
5 {) V  W* a. ^) D. W; o, {. [& ]5.程控降温仪……不赘述
+ i9 K! m7 _2 P# l" |7 ^看到第四种方法时我差点没跳起来，敢情这就叫歪打正着误打误撞？过一段时间细胞复苏的时候用台盼蓝染色检测一下细胞活性，届时把结果发回来。

wjmkg

这样做应该是可以的

wjmkg

这样做应该是可以的

daviddow

上次我也是这样，放在-4°忘了，后来直接离心，清洗，细胞都没有存活。我分析的原因是：在-4°细胞依然处于存活状态，这是由DMSO，细胞毒性大，所以细胞都死了。

267318024

学习下，还不知道呢！

djj01

我想需要再次验证反复验证，偶然的事件往往多次验证才成为科学吧。。。也有可能-4°过夜只是一个必需条件，是不是还夹杂了其他的原因？有待探讨。。。

djj01

我想需要再次验证反复验证，偶然的事件往往多次验证才成为科学吧。。。也有装入冻存管中放进4℃冰箱再放入-80℃冰箱只是一个必需条件，是不是还夹杂了其他的原因？有待探讨。。。，

djj01

我想需要再次验证反复验证，偶然的事件往往多次验证才成为科学吧。。。也有装入冻存管中放进4℃冰箱再放入-80℃冰箱只是一个必需条件，是不是还夹杂了其他的原因？有待探讨。。。，

sfk06

估计会有部分存活，但可能会有大部分细胞死亡。DMSO可能会破坏细胞膜

haibara007007

估计活性不会很高
1 S; t6 s8 r9 f( M# ?等待楼主的结果