人间质骨髓干细胞遭污染了！~

ayeqiu

下图是污染的图片
+ S0 J7 c  |1 E- \6 Y$ H
8 A/ I  ~* J; `2 t5 J拍的不是很清楚，现在用两性霉素B处理，复苏后（在冻存前已知道细胞被污染，只是觉得贵重，先冻起来再拯救！）第二天在显微镜下能观察到有少量细胞贴壁，但是换液后的下午再拿出来观察，发现贴壁的细胞还是不见了……
0 [/ }. ^- S( ]5 H# z3 A: P求助啊~

皮搋子

给你个建议：  B' `7 N' s- `& \( X. ~- H8 U
如果已经发现细胞污染，不要因为觉得珍贵就去冻存，冻存很容易发生泄漏污染液氮，从而污染液氮罐中的其他细胞。
' l2 s2 u" e" H6 i9 B/ F; z当发现污染，又不舍得扔时，应尽早用大量抗生素处理。如果能确定污染属于真菌还是细菌最好，不能建议你用10倍量两性霉素B、庆大、青霉素、链霉素四抗共孵育4h，然后换双倍或单倍量抗生素培养几天观察。这样处理细胞可能比较脆弱，换液时要注意动作要轻柔，不能吹打细胞。

ayeqiu

没有经验，一般不怎么抢救，请教了下做过的，如下：
3 ^# p  D. P# x% d) Z1 真菌污染
7 U3 m( O; s% j) j4 V# k: s( \, _6 O可以使用两性霉素B. 方法：向培养瓶中加 ...4 |; V; q" o, J
cc1986 发表于 2010-11-3 10:37

* ]9 e4 r8 n& q1 Q+ s
: x- E' x8 f9 M* D6 [5 s& e' L5 _
( E" e1 u3 T- c" E; Y    感谢你的解答~~
2 p8 Y) S4 u, G* p- P我们用25ug/ml的两性霉素B，同时加了7%的双抗处理，第二天换液，发现细胞基本上都死掉了，下图是用PBS反复冲洗后的照片……+ y; w8 b* _/ F- i) p

6 F3 k% M/ P" z7 E细胞没救了~~看来我们用的方法不得当啊，或者是换液时间没掌握好吗？

cc1986

没有经验，一般不怎么抢救，请教了下做过的，如下：
# ]6 f3 D4 m& s1 真菌污染
! ?0 G$ Q7 k; ~; O1 r% e# d# p可以使用两性霉素B. 方法：向培养瓶中加入两性霉素使终浓度达25-50ug/ml，冲击4小时，换液。如一次不能除尽，可重复2-3次。但是两性霉素B对细胞损害也是蛮大的。
0 S. Q+ j8 @7 z2 E) C2 细菌污染
8 r( @0 T5 }' r  V有人用10倍的青连霉素冲击法处理。具体操作： 弃掉培养基，换上10倍的含有青连霉素的培养基孵育40min后，弃掉培养基，在换上含有10倍的含有青连霉素的培养基培养24hr。如果细菌被杀死，然后换上含有正常浓度抗生素的培养基（P,100U/ml; S, 100ug/ml）。5 Q3 L& X$ i* M$ O; }
试试吧，也算积累点经验。

deron

回复 4# ayeqiu ' V5 a- R$ b( \6 Y
9 w+ p( v/ q9 A7 v* Y( l* S" G

: h: A& m/ r7 f1 u   弄清楚真菌还是细菌，对症下药比较好。双抗是通用的做法，5~10倍剂量的抗生素培养基处理过夜，然后换液。& G: Y% v# `7 b  B& H/ U. o7 O
  如果细胞不是很珍贵，建议扔掉算了~~~~

ayeqiu

我同学的神经干细胞也是被白色念珠菌感染了，杯具，再抽一次自己的吧，好让自己下次牢牢记住
+ P; D2 _4 ]4 ^7 f( K: R- C  cdengyuan9 发表于 2010-11-3 00:10

. A+ F5 D2 j2 T. v: v# P1 ^/ h

& l+ Y- W8 l, v) E4 q( @2 t1 q  ~: N
    抽自己的血？行得通不？

ayeqiu

图片太不清楚，密密麻麻的是不是白色念珠菌啊~~
6 z/ L- [3 }! J% e如果知道污染，最好先弄清楚是真菌还是细菌污染，然后用大 ...% A, j0 c* f/ i& f' |
cc1986 发表于 2010-11-2 23:40

2 m6 I1 E& l+ u3 e( I
* j/ ~" c) w+ u9 J5 N9 b* a
. a/ w& ]9 r- o  A
    请问你有过相关经验吗？大量的抗生素抢救，指的是双抗吗？请问是如何操作呢？

dengyuan9

我同学的神经干细胞也是被白色念珠菌感染了，杯具，再抽一次自己的吧，好让自己下次牢牢记住

cc1986

图片太不清楚，密密麻麻的是不是白色念珠菌啊~~5 J. R& m8 i  J% U# p3 l' d
如果知道污染，最好先弄清楚是真菌还是细菌污染，然后用大剂量的抗生素冲击抢救。不过这样下来一般细胞状态也不怎么样了~~