人间质骨髓干细胞遭污染了！~

ayeqiu

下图是污染的图片
* G+ _, P+ ~9 ]& r
# v" f. [  r, k/ M拍的不是很清楚，现在用两性霉素B处理，复苏后（在冻存前已知道细胞被污染，只是觉得贵重，先冻起来再拯救！）第二天在显微镜下能观察到有少量细胞贴壁，但是换液后的下午再拿出来观察，发现贴壁的细胞还是不见了…… 7 N# r" j" Y) K
求助啊~

cc1986

图片太不清楚，密密麻麻的是不是白色念珠菌啊~~7 b) t' v! h. g. b
如果知道污染，最好先弄清楚是真菌还是细菌污染，然后用大剂量的抗生素冲击抢救。不过这样下来一般细胞状态也不怎么样了~~

dengyuan9

我同学的神经干细胞也是被白色念珠菌感染了，杯具，再抽一次自己的吧，好让自己下次牢牢记住

ayeqiu

图片太不清楚，密密麻麻的是不是白色念珠菌啊~~1 [3 `* l3 @3 {! u0 W
如果知道污染，最好先弄清楚是真菌还是细菌污染，然后用大 ...4 u& L" ^0 _" G( e& d
cc1986 发表于 2010-11-2 23:40

, t1 ?5 L9 y/ Q. \
. A% G+ `* f  }! t
; M* W) F1 B- f    请问你有过相关经验吗？大量的抗生素抢救，指的是双抗吗？请问是如何操作呢？

ayeqiu

我同学的神经干细胞也是被白色念珠菌感染了，杯具，再抽一次自己的吧，好让自己下次牢牢记住; ]) \' ]$ a  T- l+ G3 G4 D# U; C
dengyuan9 发表于 2010-11-3 00:10

( ^& ~) \: o' y, @2 X3 k+ I: d
. O1 a* f3 H- s, ]) P( A  F: q: U4 J
! c3 s+ b5 m: g
    抽自己的血？行得通不？

deron

回复 4# ayeqiu
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5 p  E- u3 k8 u' x& A: w$ G- r7 Z0 D! Y  }# Z
   弄清楚真菌还是细菌，对症下药比较好。双抗是通用的做法，5~10倍剂量的抗生素培养基处理过夜，然后换液。
3 ~; R2 M  h+ q5 F2 o( B  如果细胞不是很珍贵，建议扔掉算了~~~~

cc1986

没有经验，一般不怎么抢救，请教了下做过的，如下：
0 q" _  X6 ^( T2 w; z  F' @6 G1 真菌污染 ) t, ^% ]4 P/ L" i
可以使用两性霉素B. 方法：向培养瓶中加入两性霉素使终浓度达25-50ug/ml，冲击4小时，换液。如一次不能除尽，可重复2-3次。但是两性霉素B对细胞损害也是蛮大的。* g  n1 t9 Y3 j& j; R) v: l( R
2 细菌污染
: X" }, f+ Y5 @9 y3 r; x有人用10倍的青连霉素冲击法处理。具体操作： 弃掉培养基，换上10倍的含有青连霉素的培养基孵育40min后，弃掉培养基，在换上含有10倍的含有青连霉素的培养基培养24hr。如果细菌被杀死，然后换上含有正常浓度抗生素的培养基（P,100U/ml; S, 100ug/ml）。
" V8 b& A) V6 T' \1 R试试吧，也算积累点经验。

ayeqiu

没有经验，一般不怎么抢救，请教了下做过的，如下：( L( w! h9 }1 c
1 真菌污染 * k$ A# K9 k' _  r3 f
可以使用两性霉素B. 方法：向培养瓶中加 ...# i7 B6 m- a/ J2 I* B  ^
cc1986 发表于 2010-11-3 10:37

$ A. |8 D7 d0 z& z1 ~& P
+ m6 e+ ^+ O/ V4 O
. ?# L  y( H. P3 l    感谢你的解答~~! Q. {$ J6 c- c, t
我们用25ug/ml的两性霉素B，同时加了7%的双抗处理，第二天换液，发现细胞基本上都死掉了，下图是用PBS反复冲洗后的照片……: _+ ?1 U/ }; t8 S/ H# g- `! @8 R
8 e. b8 n+ K; Y$ `8 h, _
细胞没救了~~看来我们用的方法不得当啊，或者是换液时间没掌握好吗？

皮搋子

给你个建议：8 J$ e; f7 A3 ]3 X% u* z; C
如果已经发现细胞污染，不要因为觉得珍贵就去冻存，冻存很容易发生泄漏污染液氮，从而污染液氮罐中的其他细胞。+ i8 }4 m* i: u3 Z9 ]7 J! i5 n5 [' `
当发现污染，又不舍得扔时，应尽早用大量抗生素处理。如果能确定污染属于真菌还是细菌最好，不能建议你用10倍量两性霉素B、庆大、青霉素、链霉素四抗共孵育4h，然后换双倍或单倍量抗生素培养几天观察。这样处理细胞可能比较脆弱，换液时要注意动作要轻柔，不能吹打细胞。