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nan123456

新手上路

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楼主

发表于 2010-11-16 11:30 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

兄弟正在做了，有高人指教一下

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小小研究员

沙发

发表于 2010-11-16 11:31 |只看该作者

说一下你的具体问题

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nan123456

新手上路

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藤椅

发表于 2010-11-16 11:37 |只看该作者

我的问题是用包装出来的慢病毒，纯化后，（慢病毒带有我需要的基因片段），转染IPS细胞，通过筛选得到单克隆。

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12846168

新手上路

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板凳

发表于 2010-11-16 12:09 |只看该作者

LZ，你问个问题都问不清，做的什么实验？

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nan123456

新手上路

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报纸

发表于 2010-11-16 12:17 |只看该作者

我就是用慢病毒转染IPS细胞，转染后筛选，慢病毒含有我要的基因片段，什么地方不清楚呢？

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FYH

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优秀会员小小研究员积极份子

地板

发表于 2010-11-16 17:08 |只看该作者

与慢病毒感染ES细胞程序基本一样

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nan123456

新手上路

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7楼

发表于 2010-11-16 19:06 |只看该作者

具体点行不行呢?多给点建议

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daviddow

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金话筒优秀会员

8楼

发表于 2010-11-16 20:02 |只看该作者

lentivirus转染细胞有很多步骤，你那里有问题？你说的详细些，大家也好给你建议

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王乾

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9楼

发表于 2010-11-16 20:31 |只看该作者

1，选择合适的病毒载体和包装质粒
2，传代293T，10cm的皿500万细胞，传代后12-16小时转染，每种质粒我一般转5-10ug，最好用钙转。
3，6-8小时换液
4，换液后36-48小时收病毒，尽量避免培养基发黄。滴度一般怎么也能到10^6。" f) o1 I+ R6 X* k
5，感染前6小时传ES，我一般一个六孔板的一个空传2万个细胞。% M7 a$ N; w8 J. p
6，感染，轻轻吸掉ES的培养基，换成病毒液，加入polybrane。! [- V" s2 C& p/ ?3 z& Q2 U
7,8-12小时换掉病毒液，72小时后测流式。