请问如何进行EB分化为三胚层后的鉴定，主要鉴定哪些标志

coralqin

刚想回复呢，仔细一看zerollx 贴出了本人以前发的一篇文章，惭愧:$

iyaofying888

非常好呀

牙牙丫丫123

呵呵，不错……; C. R$ e8 B2 n( N2 Q( A! A# e

zerollx

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0 Q! P; |4 G' A  k3 z. i2 K5 F5 c' H3 a/ f3 q0 K4 _2 s' n- }. d
三胚层的鉴别8 f; N1 V+ J; S: |( i0 o3 T. T
  1、形态学观察：ESC在不同的发育阶段有不同的形态，在11天时则出现典型的三胚层形态，可用相差显微镜观察。
9 ?( R8 D4 L0 a! T) Z2 `; r   2、三胚层中表达的特征蛋白的检测：免疫组化实验检测，EBs分化15d左右, 中胚层心肌细胞特异性标
  s4 y, b! Z8 d) p* I% J  F志蛋白c TnT( 图9) , 外胚层特异性标志蛋白Nestin4 ~+ H# C8 R, j0 ^  w8 B2 q
3、三胚层中标记基因的检测：在ESC发育各阶段提取总RNA,个标记基因的引物进行RT-PCR，电泳鉴定片段大小来检测是否有表达。
( [( Z" H. O3 Q' h3 ?$ a, L     内胚层：特征性基因转甲状素蛋白、 甲胎蛋白在EBs 分化的初期不表达,从分化的第7d 起开始表达
  j9 ~# n- i7 \) t2 w+ H; ]    中胚层：波形蛋白等
# ]1 `8 P5 I1 ^6 E# F, B- A1 ^2 B    外胚层：巢蛋白等
9 o' t" E7 Z) q3 _% H; M1 T   具体你可以看这篇文章：体外分化过程中小鼠拟胚体的细胞学特征及基因表达模式