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# K6 X: v% V3 e. V2 E" v: T# w7 C; f1 Q9 T& B: M5 P
三胚层的鉴别
0 C8 Y6 B' U- T3 j# U- g 1、形态学观察:ESC在不同的发育阶段有不同的形态,在11天时则出现典型的三胚层形态,可用相差显微镜观察。
# ]9 o. }. C% F 2、三胚层中表达的特征蛋白的检测:免疫组化实验检测,EBs分化15d左右, 中胚层心肌细胞特异性标
E* L' n2 y, ?9 U, E+ ]: P. x志蛋白c TnT( 图9) , 外胚层特异性标志蛋白Nestin( {! a' W4 t6 ~6 h
3、三胚层中标记基因的检测:在ESC发育各阶段提取总RNA,个标记基因的引物进行RT-PCR,电泳鉴定片段大小来检测是否有表达。6 B; @7 \# C0 h7 \1 i
内胚层:特征性基因转甲状素蛋白、 甲胎蛋白在EBs 分化的初期不表达,从分化的第7d 起开始表达9 j+ F+ B6 R9 X, l+ X
中胚层:波形蛋白等
) i9 Z6 ~2 L" B8 |2 x& v% U$ Y! u 外胚层:巢蛋白等
b! S- V' o! _# y8 t 具体你可以看这篇文章:体外分化过程中小鼠拟胚体的细胞学特征及基因表达模式 |
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