请问如何进行EB分化为三胚层后的鉴定，主要鉴定哪些标志

牙牙丫丫123

7 f, r! z* a1 A6 E1 @/ M" l
1 x! J! m9 |+ h+ V$ [' W! A
请问如何进行EB分化为三胚层后的鉴定，主要鉴定哪些标志

zerollx

回复 牙牙丫丫123 的帖子
% P; C9 o$ M- ]8 ~3 ]# }0 G  g: e. N# ?. B* z
三胚层的鉴别; _* G7 ]- K- N* V" O, F
  1、形态学观察：ESC在不同的发育阶段有不同的形态，在11天时则出现典型的三胚层形态，可用相差显微镜观察。) J& h+ S1 P% k( Z, y; _0 x
   2、三胚层中表达的特征蛋白的检测：免疫组化实验检测，EBs分化15d左右, 中胚层心肌细胞特异性标+ o! T$ S, \' d! L# k' t( j0 _) Z; J
志蛋白c TnT( 图9) , 外胚层特异性标志蛋白Nestin
4 x1 W" _; \$ Y, P" ?$ l4 M 3、三胚层中标记基因的检测：在ESC发育各阶段提取总RNA,个标记基因的引物进行RT-PCR，电泳鉴定片段大小来检测是否有表达。
: Q! i. L/ x( l. k6 F, p, t( b     内胚层：特征性基因转甲状素蛋白、 甲胎蛋白在EBs 分化的初期不表达,从分化的第7d 起开始表达4 j" u5 U# V( b& w
    中胚层：波形蛋白等) i7 o$ U9 c/ ^8 C; `
    外胚层：巢蛋白等
5 i7 @; g9 t$ s- \1 g6 c  f9 Q   具体你可以看这篇文章：体外分化过程中小鼠拟胚体的细胞学特征及基因表达模式

牙牙丫丫123

呵呵，不错……
" Q8 O$ e* r% [& ]

iyaofying888

非常好呀

coralqin

刚想回复呢，仔细一看zerollx 贴出了本人以前发的一篇文章，惭愧:$

细胞海洋

回复 coralqin 的帖子
9 @- v( S6 b! m4 S) h
/ g8 R* Q, `+ K) Y( p4 n' _, ]' j- @欢迎原创作者 发表意见

jjjk127

好东西 ，学习:)

lp871

:D:D:D

shuishan

请教各位大牛：想做IPS向心肌细胞的诱导分化，请问形成EB后贴壁生长多久可见到心肌细胞，是不是可以见到心肌细胞跳动？上面说15天左右可检测到心肌细胞特异性标志蛋白c TnT，若想用分化的心肌细胞做下一步实验，是不是只要检测到了这种标志就可以了？怎样将其纯化了？好像心肌细胞是不可再生的，那这样分化得来的心肌细胞能否进行传代增殖呢？

细胞海洋

回复 shuishan 的帖子
# Y5 y1 @/ I+ ]9 N) t
0 z/ ~/ n  J" a建议你发新帖提问