问个问题，人类iPSC做畸胎瘤

ghfvcat

问个问题，人类iPSC做畸胎瘤的时候裸鼠行不？
& n  G: |1 v0 Z6 s+ I我看文章上有的用裸鼠，有的用SCID鼠，甚至NOD-SCID的，问一下，裸鼠的成功率有多高？
  d  g& ]9 Q6 C2 S( i用雌的还是雄的有区别么？

ghfvcat

回复 瑟瑟狼 的帖子
& O$ [, e* `! d
9 G0 F( G* V, K4 o5 F5 j' }回帖庆祝一下我的畸胎瘤成功长出，多谢瑟瑟狼童鞋，; A9 f7 O; c7 A4 v
再麻烦问一下，各位在上海的同仁，哪位实验室有切片机的，能否帮忙做个切片？实验室没有切片机，实在悲剧。
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' Z% T( ?& f5 v6 b1 O! X8 B; a$ A+ g* k

gact

太给力了。。。这个贴 我收藏了。。

zsycgz

瑟瑟狼很给力！很不错哈！学习了！:lol

瑟瑟狼

回复 ghfvcat 的帖子2 t: Q) b! \  |' s
+ r6 ?5 {# k8 n& E/ d5 C/ R5 u
忘了给你说注射部位，一般在皮下松弛部位就可以，原则是成瘤之后不影响老鼠运动。。。

瑟瑟狼

回复 ghfvcat 的帖子
4 B, z4 g! g; H0 B) E7 r$ B% u$ R
建议参考Takahashi《Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors》文献
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我自己的克隆。。。+ A! y; j5 ]4 b

; e' L2 ^$ ~5 w4 y6 V) Q* S8 H2 d- D" r
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一个十厘米的皿我打两个点。。。每点200微升液体。。。3 M2 t" s# \, n& R+ U7 i
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也有人说把克隆团块用胰酶消化计数，但我个人认为不好。。。9 b1 v$ M/ A( z: ^) t" P
根据文献《Mitochondrial Metabolism Modulates Differentiation and Teratoma Formation Capacity in Mouse Embryonic Stem Cells》
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文献中有一个确定的观点，细胞越容易分化，成瘤率越低。。。- Y9 e* D  S4 i' [
根据克隆传代经验，克隆团块是经不起胰酶消化的，消化之后分化率太高；: a8 F3 t+ f0 N; b* m2 J% r6 J
就算是用四型胶原酶消化，也有一定的分化率；9 O8 \' v% e0 |( e) M7 y

- A' x6 Y7 v7 ^! T3 A4 g) s所以参考takahashi的方法，用四型胶原酶消化之后收集克隆，不做计数，直接注射。。。
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9 O$ o  O: b1 `* s7 h甚至可以用机械法把克隆一粒一粒收集下来，这样更保险，就是工作量大了一点。。。

ghfvcat

回复 瑟瑟狼 的帖子3 [, f7 w) U2 H7 `

5 K: j0 I' N: M5 W呵呵，恭喜恭喜，
# c& G. m# G$ s( c; A0 G  |' o5 U还没开始打，心里没啥底。
& O0 w+ \2 b  z* y/ R% Q# N请问你一只老鼠打了多少细胞？打在什么部位？

瑟瑟狼

:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol' G& v0 D; F1 h) r& e

2 D1 ]" n, x0 s3 C今天刚刚检查了一遍老鼠。。。我的畸胎瘤出来了，各种开心，各种兴奋！！！
/ W* ^. V4 T7 E  G4 [& c
0 b# l4 @) P) e3 r+ e+ o9 ~4 B0 v. j! Q我用的人的IPSC，BLAB/c 裸小鼠，注射时候是四周龄。。。
8 j/ U0 h+ w- Y! ?3 R8 ]雌雄我没设对照。。。
  J0 k$ {1 Z6 W9 z6 `  a9 y! R3 F" [/ ~# l, P
至于说选用老鼠，关键是免疫抑制的问题。。。
. A: H( S3 h+ Z4 y7 g; E$ N9 X. Q, c! S7 ]1 y5 o8 q
BLAB/c是T细胞缺陷，SCID是T、B、NK细胞全都缺陷。。。
$ F( y* [  s8 K" F# {因为他们有免疫缺陷，所以饲养条件要求高
( y3 f4 W& `  ?0 R+ v
7 L0 n# d, @+ O" Q  t至于注射时机，也很重要。。。
& j# F3 t0 D2 ^( o( r成年裸小鼠（6--8周）较普通鼠有较高的NK细胞活性，但幼鼠（3--4周）NK细胞活性低下。。。/ m2 f: F/ Q1 ]( m' Q' d
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