成骨成脂诱导液的配方

yangjie0329

有谁知道成骨成脂诱导液的配方，其中成骨成脂诱导液中地塞米松的浓度分别为多少呀？

tangyvhuang

诱导脂肪实验试剂：
. z# C$ f8 @, Q2 }; ?$ R2 ~! h3 ^& f- {' t4 J
诱导剂：（DEX  1um/L,消炎痛 200um/L,   IBMX  0.5mM/L,  胰岛素10ug/ml）
2 f0 a; r, b- R- I! I固定液：10%甲醛! @: d7 r6 i5 }' f9 Z
染色液：油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中。做为储备液室温放置。 临用时取储备液6ml加入4ml蒸馏水中。过滤后并在2小时内使用。3 k1 s% o: A9 v1 S# C

2 Z  \) N3 a1 C/ K& S2 b9 W操作：1，固定：吸弃培养液后加入固定液5min.5 Z9 q5 K* D6 S) P/ g. j
      2,吸弃固定液，加入染色液15min后水洗一次镜检观察# \3 t4 B+ G- D5 p( A( S- i. B

tangyvhuang

诱导成骨实验试剂：
: D) ?3 B0 E+ E* r诱导剂：（DEX  0.1um/L,  β-磷酸甘油 10mM/L,   2-磷酸Vc  50ug/ul,  ）( T+ ]8 j: M# a, \. ^/ T' v+ a4 G
固定液：甲醛：甲醇=1：9混合， 4摄氏度存放。
2 F0 o! B2 o* z5 p% g0.2M丙二醇 ：丙二醇2.103g加入蒸馏水100ml ，4摄氏度避光存放。  p! j0 H0 ?9 o8 R1 U
0.05M丙二醇：0.2M丙二醇12.5ml+ 0.1N HCL  2.5ml 蒸馏水35ml, 4度避光存放。8 E0 i& g0 r$ f  a% p. Q. D
  基质液：α萘酚磷酸钠 35mg+坚牢蓝RR 35mg 溶于35ml0.05M丙二醇中
2 \: i) A. w0 p8 \
4 }! x# K# w! \# S: m  K4 l操作：1，固定：吸弃培养液后加入固定液30sec 冲洗，晾干。
& z8 B2 g: f( E9 f, s. ~      2,基质液用NaOH调节PH为9-9.6，过滤$ g* @+ K7 Y6 a+ A- _4 l5 _
3，染色30min，最好是13摄氏度水浴' ~& p- W' {+ k! i! I9 ^
4，冲洗晾干
! U, a4 G. t- n% i7 N! h

yangjie0329

回复 tangyvhuang 的帖子& ^' p1 [5 Y+ a
1 @% v, j9 l3 r
谢谢

zerollx

回复 tangyvhuang 的帖子, s$ C% q9 L5 g' l; j4 i
; w$ }* E1 {* S2 O* s0 }
2-磷酸Vc 是 50ug/ul还是50ug/ml？

nannan2ping

回复 zerollx 的帖子3 v% h5 M! Q7 N* n5 g1 x
5 `; w" h$ N9 T' w
应该是50ug/mL吧，也就是50mg/L

ljzmy82

直接到invitrogen 买一瓶成骨分化做得效果跟好，自己配得不是很好用，个人经验！

4445655

成脂诱导培养基主要以DMEM完全培养基为基础并含有10%FBS，1μM /L地塞米松，0.5mM/L IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤),1X ITS(胰岛素铁硒传递蛋白)其中1X ITS可用10μM /L胰岛素，200μM /L吲哚美辛代替。8 s& Y9 @# u2 c
成骨诱导培养基主要以DMEM完全培养基为基础并含有10%FBS，100nM/L地塞米松，50μM/L L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐， 10mM/Lβ-磷酸甘油钠，若无L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐可用50mg/L维生素C代替。5 p7 [8 r! C7 e! f9 m0 Y# Q" D3 r. B
希望对你有用。

liuyul03

关于成骨啊，成脂啊诱导液的配置，文章上就有，而且非常成熟了，也有商品化的在卖。