求助：Lipofectamine 2000中文说明书

crystal

英文的我有了，看不动！
/ R6 K. A) Y! Q5 D-----这个很简单的嘛，很容易看懂，慢慢看！如果就只是想说这类-语言的巨人行为的侏儒方面话的请慢走！, r( t& W# Q9 `+ J- K$ i" E
最近要开始做实验了，头痛死了！

jefferson

不同的细胞已及转不同面积的孔板操作起来略有不同，以转染六孔板的贴壁细胞为例：
+ @/ I- y0 j6 y7 t. n  E2 h1．接种细胞。转染前一天将细胞接种至六孔板内。细胞接种数量视其生长速度而定，一般为1×106个细胞。转染时要求细胞汇合度为90~95%。转染前两小时对细胞进行换液。
4 g, j# v6 ~; d% _) r' {  W% u  A2．将4ug的质粒DNA加至250ul的OPTI-MEM培基中，混匀。- t0 p: P0 C- Y, y/ b9 W
3．将10ul的Lipo2000加至另外250ul 的OPTI-MEM中，轻轻混匀，室温静置5分钟。
; G! p4 P' X  k/ w+ H2 j" N4．将DNA悬液和Lipo2000悬液混合，总体积500ul，轻轻混匀，室温静置20分钟。$ o5 j& D; ?! `4 x' \9 A9 z- k
5．将DNA和Lipo2000混合液加至六孔板的孔内，前后左右晃动孔板混匀，置于培养箱中培养。* V  z& W  u$ U* X# X+ ]& ?
6．转染4-6小时后，细胞换液，每孔2ml培基。9 F/ P' t  l2 O$ N$ f; j
7．转染18-48细胞后，收集细胞检测表达，或加入抗性培基筛选稳定表达克隆。
# }$ `, ^" u3 G: n( y( u- j' ]5 |7 N0 S4 }
注：1. 如果没有OPTI-MEM培基，用培养细胞的无血清基础培基替代也可以。
9 M; S# u! z9 }; B5 m; o　　2. 该说明为一个孔的用量，同时转几个孔时按需加倍。若转染其他类型孔板，DNA和Lipo2000用量参见试剂盒说明书中的表格。可根据实际质粒和细胞的转染效率，分不同量摸索最佳DNA和Lipo2000的混合比例。
  j: p. X0 _3 j　　3．转染4-6小时后也可以不换液，但由于Lipo2000具有一定的细胞毒性，作用时间过长可能使某些细胞出现大量死亡现象，建议换液。9 c& k7 O/ s5 T- i. i# s

64627675

呵呵，不用我翻译了

gact

crystal

谢谢楼上的，本来我都没抱希望的，呵呵，收藏下来先！

做个好孩子

我们实验室也用过lipo2000,说明书要求细胞的铺板密度需要达到90%-95%，转染效率倒还可以，只是转染后飘起来的细胞太多了，最近计划用转染A549细胞