ips细胞几天换液好，培养30代需要多长时间，谢谢！

manybit

ips细胞几天换液好，培养30代需要多长时间，谢谢！

葱葱

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请问怎么彻底除掉焦虫呢？你有好的方法吗？

922922922

回复 葱葱 的帖子  t$ k* @4 v) X1 e" I# l# z
* @2 i, H1 K- g
你用PBS洗一下试试，如果还是虫子不断增多，那可能是黑胶虫污染了。最好弃掉不要了

Jonathan

回复 573639471 的帖子
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  c  Q. g3 y, h9 T6 B鼠ips，还必须做嵌合鼠。。。现在我不知道需不需要做成体小鼠发育，但是嵌合鼠是必须的

Jonathan

鼠的ips我做的很少。对于人ips，楼主还是参考我的意见吧。看见很多人回帖，很多都不知道是不是没经验。人ips的培养基，里面有一种很重要的生长因子，是bfgf。如果是用在feeder上面的话，我们通常会加4-10ng/ml，如果是买的mTeSR1或者E8，里面的浓度应该是100ng/ml。培养基是必须天天换的，因为bfgf的稳定时间是大概18个小时。如果超过18个小时，或者隔天换液，看起来细胞可能不会有什么变化，不过仔细做一些基因表达吧，会有不同。所以每天换液是必须的。4 y& ~5 b- B' h, L$ X. w2 E

* h9 V/ G# ~$ k0 i7 e! F8 e第二个问题，隔多少天传一代呢。对于很多人来说，克隆不分化，还没长满就不用传的观点是不对的。如果是用matrigel或者geltrex或者vitronectin作为matrix，通常80%-90%就必须传。传代的比例根据不同干细胞系的生长特性而定，从1/10到1/20不等。这样的话，保持4天或者5天传一代对于细胞来说是最好的。如果超过5天，matrix是没法坚持那么多天的。所以即使没有满，也必须传。

葱葱

回复 922922922 的帖子* ^3 C1 N# ]1 M0 Z  q& ?# K$ |
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我养的细胞出现了污染，感觉好多小虫子！是突然一夜爆发的那种！

葱葱

回复 manybit 的帖子& {$ S! K% A( ^, y8 x7 u: p& t4 T
# Q1 G0 x7 y) t, W
最好每天换液，人一般是3-5天一代。请问你挑克隆时用的什么方法？

922922922

回复 manybit 的帖子( p8 `# ?4 N" {0 U* D
6 R! z! @$ s, Y/ v
我们的经验是如故接种密度不大，根据第二天培养液的颜色，前几天可以隔天换液，但是随着克隆增大，一般就一天换一次液了，真心觉得养这种细胞很烧钱。

Takano

回复 573639471 的帖子
8 |. {9 E7 P- h/ J/ Y# O9 H$ J
4 u3 ^% A, @1 e6 Q* U科普很好，赞:D

573639471

回复 docqbzcn 的帖子! F6 n% Z# Q5 m  j4 ]% s
/ M. P8 L  E- F# T% U
胚胎干细胞全能性的鉴定主要包括以下几个方面：
7 X' p9 F1 K- s7 I% B0 F        碱性磷酸酶活性检测7 S" r/ P- J2 a
        干细胞表面marker的免疫染色检测
4 d; ~9 }0 X! ?" ]2 M% n        干性因子的去甲基化分析
& m/ J5 \5 h( |3 |* @# x2 a- x        干细胞内源基因的表达分析7 T$ I5 H; r& P( B
        端粒酶活性检测
3 f' O  x$ T% }9 P4 f5 d        核型检测
% m0 o! s- N' p; K        拟胚体形成/ I( t! p$ |0 q, s7 n% H# E+ l
        畸胎瘤形成实验
/ N4 |! m, l0 T1 q; r至于表面Marker，人和鼠的ips是不同的，但是OCT4、SOX2、Nanog都是要检测的。人还要检测SSEA-3和4，TRA-1-81，TRA-1-60；鼠还要SSEA-1$ N' }4 l- ^* C