求教：如何提高脂质体lipofectamine TM 2000的转染效率

mckf111

各位前辈 小弟现在做B16F10鼠黑素瘤细胞转染 用的质粒是pIRES2-EGFP 脂质体是英骏的lipo 2000+ Q$ ]  z, w# k) h, b, a3 v2 v$ M
先开始在六孔板接种 大概长到70%左右行转染（因为此细胞消化后极易成团 吹打N次也没啥用 所以孔内细胞克隆很不均匀 有的地方密 有的很疏 ） 过了36-40h后 发现孔内大概只有5%-10%的绿荧光细胞 而杂细胞基本铺满 接着 消化到其余两个孔 过6h加G418（900mg/L）筛选 过三天只有少许细胞死亡 于是加压到1200mg/L 又过三天死了不少 但是新长得也很多 荧光显微镜下观察 每孔大概只有1-2个阳性细胞 于是 放弃。。。
. B2 x1 Y5 b3 h1 m/ y( x7 W1 o请问各位 我应该在哪些步骤做如何改进 能够提高转染效率 而不至于筛选的阳性细胞太少？？？

mckf111

回复 qingbao 的帖子7 \% Y* `  `: T  s4 S6 j

3 j) s( \0 E; V" t& L3 N) [非常感谢 再问下筛选前细胞融合度大概要多少合适？

mckf111

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1 F3 }" @9 v3 O  x' @$ J& ~: G
2 L: l& t3 z/ m你的转染效率如何啊？

mckf111

回复 crystal 的帖子& R8 M. F  e+ g2 `$ _# k2 ~  n
3 N% p$ n( r8 I4 C. `
什么细胞啊 这么高的效率。。