紧急求助：染色体G显带

lorey

同样的处理，第一个图没有胰酶处理，结果染色体还很漂亮，可是第二副图是胰酶处理40s后，成了那个样子，怎么回事呢？其他的条件完全相同啊。
' V- ?; Z# j" G; L另外，大家在做G显带时时怎么做的呢？

jefferson

这两种核型都是不能做带型分析的, 都没显出带啊
7 E% Y  D9 P3 m, X) l& v4 {
' r5 X0 x8 N* U  }% w5 U两幅照片中的核型都不分散, 应该是低渗的时间短了, 或者滴片时高度偏低, 所以染色体分散不开, 这种核型只能作为看染色体数目是否有异常之用.
" A/ d- d9 s3 F7 F8 b; _5 m; _" t
  Z% j+ W3 Y- v$ t& y另外两个核型中的染色体都偏短, 下面一幅的稍好点, 但是还是短了, 应该是秋水仙素的处理时间过长导致的.+ B; v; D3 q! U5 P

1 R8 x! _* a. _5 v: N胰酶消化时间过短就不会显出带型来, 没用胰酶处理的和处理过的都没带型, 说明消化时间不够. 另外上面照片中的染色体染色较深, 说明染色时间长了, 应同时多做几张片子摸索消化和染色时间. 消化不充分没带型, 消化过了的话, 染色体会发毛, 但还是会有带型出来.

ydj19830

显带的话染色时间可以再长点点.... B* D) L* n+ |3 l6 f
我做的植物的...

ydj19830

滴完之后可以加一滴固定液（卡诺），让染色体铺开些。。。
0 _* f3 u( y2 \$ n* t; L. |3 Y5 O从你第一张照片看，染色体长度已经可以了，分的再开点可能更好..., Q) a6 d8 c1 n0 y9 {* m
我用60度高温处理染色体过夜，有时候也显带...不过是植物的。

fananran2003

学习了，一楼好专业啊，最近也做核型，效果也是不理想，楼主能不能给些详细的步骤和解说啊

lorey

回复 jefferson 的帖子( L4 ], g+ m7 N% |

6 L3 T2 S; t  X0 r0 ~两幅图是同一个细胞，滴了两张片子而已，低渗什么的都是一样的，秋水仙素是1h。
$ z5 Q: _% q+ ]/ J, o
0 |  w+ j" ?9 g; {8 x! k2 i. O& E我做了秋水仙素处理0.5小时的，但是分裂相太少，几乎找不到染色体，那样时间是不是太少？
& [: ^- h4 U- ~5 m' H
3 F# I- i  |7 \& r- V# V& L* A下面的图是消化不够吗？如果长了的话，会不会全都变黑？0 v: c, ]0 m. f: q; A* Q4 s& s! G0 b3 n  o
您能不能给我一个完整的Protocol呢？十分感谢！

jefferson

lorey 发表于 2011-3-16 10:06
8 p( v* @3 u  H$ _7 }8 [; l" [5 \回复 jefferson 的帖子/ f. E" s* P7 y1 U& V! `

% y; t1 ]7 ~. F$ I两幅图是同一个细胞，滴了两张片子而已，低渗什么的都是一样的，秋水仙素是1h。

; P5 a  a% Y' X! j4 j
不知道你的是什么细胞, 不同细胞在处理细节上稍有不同.
0 ~# v; a0 w- p% ~
  ~5 ~  K. c$ {秋水仙素不知道你用的是什么浓度的, 其存储浓度一般是20ug/ul, 对人血细胞来说, 工作浓度大概0.1-0.15ug/ul (估算). 处理2.5h 后收获. 细胞类型不同, 需要调整秋水仙素的工作浓度, 以具有较多分裂相同时染色体伸展较开为原则.& m0 X/ W( ?9 K. @5 r
# X9 Y& k7 {4 L" G+ |% s/ L! m) Y
你的结果低渗的肯定是不够的, 染色体大部分还聚集在一起未分开. 所以需要注意下.
* H: T" X, j  |5 J- @, J
- F- ~1 w' ~' W7 t! [关于消化, 还上面我的回帖里一样, 消化时间不够没条带, 消化过了也会有条带,只是染色体会有点发毛的感觉.