紧急求助：染色体G显带

lorey

同样的处理，第一个图没有胰酶处理，结果染色体还很漂亮，可是第二副图是胰酶处理40s后，成了那个样子，怎么回事呢？其他的条件完全相同啊。
5 ]7 z1 z; v) g另外，大家在做G显带时时怎么做的呢？

jefferson

这两种核型都是不能做带型分析的, 都没显出带啊4 W) \1 k3 e5 m  X! `

! f& N" n/ _9 ^5 V2 i两幅照片中的核型都不分散, 应该是低渗的时间短了, 或者滴片时高度偏低, 所以染色体分散不开, 这种核型只能作为看染色体数目是否有异常之用. ! ]1 A3 T6 W3 k7 L! e" u
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另外两个核型中的染色体都偏短, 下面一幅的稍好点, 但是还是短了, 应该是秋水仙素的处理时间过长导致的.
6 T' D* \' [+ ]8 g. e- L6 j) M" F0 b
胰酶消化时间过短就不会显出带型来, 没用胰酶处理的和处理过的都没带型, 说明消化时间不够. 另外上面照片中的染色体染色较深, 说明染色时间长了, 应同时多做几张片子摸索消化和染色时间. 消化不充分没带型, 消化过了的话, 染色体会发毛, 但还是会有带型出来.

ydj19830

显带的话染色时间可以再长点点...
: G) W9 `6 J  X. K+ ~1 \我做的植物的...

ydj19830

滴完之后可以加一滴固定液（卡诺），让染色体铺开些。。。) z/ B1 L4 p1 w0 s
从你第一张照片看，染色体长度已经可以了，分的再开点可能更好...
6 z5 L& Z! c% H7 |! q我用60度高温处理染色体过夜，有时候也显带...不过是植物的。

fananran2003

学习了，一楼好专业啊，最近也做核型，效果也是不理想，楼主能不能给些详细的步骤和解说啊

lorey

回复 jefferson 的帖子* i( ^' G9 {5 t* U

9 V6 M/ V+ D2 ~两幅图是同一个细胞，滴了两张片子而已，低渗什么的都是一样的，秋水仙素是1h。* G0 T/ g6 a6 {9 g7 ^

* m) x% a2 {$ P  k3 {: P我做了秋水仙素处理0.5小时的，但是分裂相太少，几乎找不到染色体，那样时间是不是太少？! E/ _1 F9 t  \5 T. A/ e- ~- ~+ K

0 F  K* B, C. ^4 W下面的图是消化不够吗？如果长了的话，会不会全都变黑？
) D- Q# K+ k" j6 v您能不能给我一个完整的Protocol呢？十分感谢！

jefferson

lorey 发表于 2011-3-16 10:06 % f: U' Y* z- h8 j1 t2 y" _/ r, @8 c
回复 jefferson 的帖子
% i7 N; _; `9 q; ]/ K. `8 m
, n. }! ?( R8 b" M) c* K两幅图是同一个细胞，滴了两张片子而已，低渗什么的都是一样的，秋水仙素是1h。

$ O/ d' G5 |- z; v- B# ?
不知道你的是什么细胞, 不同细胞在处理细节上稍有不同.
% K7 H  ~, V) f3 z1 ]- b" j& O" h& E: c
秋水仙素不知道你用的是什么浓度的, 其存储浓度一般是20ug/ul, 对人血细胞来说, 工作浓度大概0.1-0.15ug/ul (估算). 处理2.5h 后收获. 细胞类型不同, 需要调整秋水仙素的工作浓度, 以具有较多分裂相同时染色体伸展较开为原则.
9 `* `* Y/ z6 B! R7 F0 G
3 w! F" w. `6 G2 a0 \7 S" Q* a" b: l你的结果低渗的肯定是不够的, 染色体大部分还聚集在一起未分开. 所以需要注意下. . y$ A$ i. L/ e" w# Y0 h$ {

. q/ Z1 [) K  Y9 s& ~- [+ s6 e关于消化, 还上面我的回帖里一样, 消化时间不够没条带, 消化过了也会有条带,只是染色体会有点发毛的感觉.