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ES 细 胞 是 来 自 着 床 前 胚 胎 或 胎 儿 原 始 生 殖 细 胞 的 、可
/ g( {9 p) u. e. Y! {& Q: ~. K1 }2 O( n在体外分化状态下长期增殖传代培养的、具有稳定的二倍体( X3 e; v1 I6 K
核型和多能干细胞表面特异标记的、可分化为三个胚层来源
6 n5 z$ A8 B% O3 G) @+ R0 M$ i' t的各种组织及细胞类型的永久细胞系。ES 细胞鉴定的理论 [( X) v- J) v! w# T
基础是其生物学特性。( ? i) |+ z6 c" z, |, m: Q
形态学特征 ES 细胞在胰酶和无 Ca2+、Mg2+培养液中形: v9 i" @5 t* g8 J( [( U1 D7 H/ L
成相对扁平紧密的克 隆 群 , 并 易 解 离 为 单 一 细 胞 ; 而 胚 胎 生, ]' h( K. h: y: g
殖细胞(EG 细胞)为圆形克隆群,且很难用常规方法解离。ES+ q& ^( _; f+ }
细 胞 生 长 缓 慢 , 对 数 生 长 期 为 36 h, 而 EG 细 胞 对 数 生 长 期
: a* e/ ^: Z- o: u6 [为 12 h。人 ES 细胞与哺乳动物 ES 细胞具有相似的形态特征:
$ _ z# I! a) N* I$ [7 ^7 L细 胞 体 积 小 , 核 大,胞 浆 少 , 有 一 个 或 多 个 核 仁 , 核 质 比 高。
0 R$ g3 }8 [/ x2 tES 细 胞 在 体 外 培 养 时 呈 集 落 状 生 长 , 就 集 落 形 态 而 言 , 人
7 x; e+ B3 g; e( y( ]: k" ~EG 细胞集落与小鼠 ES 细胞集落更接近呈紧密牢固结合、多
. i) W1 r3 D4 e- n$ I6 i5 B, |层密集立体生长的无明显细胞界限的集落; 而人 ES 细胞集
1 [1 s* B7 i) \; f2 Y落呈相对松散、扁平状集落, 集落内细胞界限隐约可见。# o# j( M. `; R0 Q
* H" G( {" K! p! ^$ d核型分析 ES 细胞具有正常稳定的二倍体核型, 可作
2 U0 N7 S& y" I& Z4 x* U为生物发育机制和移植分化细胞的 研究模型。
5 H( @4 x e% n
3 X8 N" ~8 y1 j( m0 ^. e. V 端 粒 酶 活 性 端 粒 是 位 于 染 色 体 末 端 的 重 复 DNA 序
+ A/ |1 f& a5 S. [& A0 B% M列—TTAGGG, 其长度作为细胞分裂及细胞衰老的生物时钟。
- ?, V* m6 U* G它在每一次分裂中都会变短, 但可被端粒酶修复。端粒酶是
7 _- l" w- V) R5 H一种核糖核蛋白, 与维持真核细胞染色体末端的端粒长度和
' z- O- j& G& k0 s控制细胞寿命有关。端粒长度对其复制寿命具有很重要的作
. G7 \+ a; |; M+ M# D7 _" E用 , 端粒酶的 表 达 与 人 细 胞 系 的 永 生 化 程 度 高 度 相 关; 向 人4 w- T0 h: ?. ?' }4 h
的某些二 倍 体 细 胞 中 重 新 导 入 端 粒 酶 活 性 将 会 延 长 其 复 制
' a! v( ~9 p- G% q" ^3 w) B寿命; 人的二倍体细胞不表达端粒酶活性, 随着年龄的增长,
1 ~8 U. U: d! p) `8 P, ^4 q( P8 R/ \其染色体端粒 变 短 , 在 组 织 培 养 过 程 中 , 经 过 有 限 的 增 殖 期6 z* h5 `, N7 E- E& e2 ~# |
后, 即进入复制衰老状态。大多数体细胞的端粒酶活性都不高,9 p. | J8 C( p
并在 50~80 代有限的增殖后进入老化阶段。ES 细胞则表达, g* d, t' ~3 i0 j- D# h; Y+ y- L
高度端粒酶活性, ES 细胞即使长期培养 1 年, 传代 300 代仍3 h% f- j: Z7 j1 ^: a! l
表现有高端粒酶活性, 表明其复制寿命要长于体细胞的复制6 v- ~& h. M# j) y! j+ }
寿命。由于 ES 细胞在体外培养中长期保持早期胚胎细胞的
9 u9 u$ \$ J2 R# U8 g z/ C性质, 因而对研究细胞衰老和干细胞扩增机制有重要意义。& J i/ T6 F& {
1 T! J0 T6 |' h! P& C 细 胞 表 面 抗 原 的 表 达 ES 细 胞 具 有 表 达 早 期 胚 胎 细3 ^0 J8 }$ H0 U( F
胞、EG 细胞表面抗原的特性。人 ES 细胞表面抗原的表达与$ A; N' q, T% c' S0 A
小鼠 ES 细胞存在明显的种属差异, 如小鼠 ES 细胞表达早期9 v1 s p/ t" |
胚胎细胞 的 特 异 性 表 面 抗 原 SSEA- 1, 但 并 不 表 达 SSEA- 3' R Y, t1 f, e- V; `) X
和 SSEA- 4,而 人 ES 细 胞 则 表 达 人 早 期 胚 胎 阶 段 特 异 性 抗. X& x* C3 D# t0 L
原 SSEA - 3,SSEA - 4,TRA - 1 - 60,TRA - 1 - 81; EG 细 胞 表 达
' E) H$ c/ s" e& g1 ~SSEA- 1,SSEA- 3,SSEA- 4,TRA- 1- 60,TRA- 1- 81。 人 ES 细 胞
: {+ D7 G+ `7 Y+ D6 _表 现 SSEA- 1 阴 性 , 而 小 鼠 的 ES 细 胞 和 EG 细 胞 则 表 现
/ _/ P- R5 U u D8 {SSEA- 1 阳性, 因此, 常用单克隆抗体 SSEA- 1 检测 ES 和 EG
" s/ E! Z" F1 k8 a! i细 胞 表 面 抗 原 作 为 发 育 全 能 性 的 一 种 标 志 。 目 前 认 为 ,
; x' O" \2 e5 b# h( hSSEA- 1 的表达与否, 可能反映了相对扁平疏松结合的 ES 细
5 E& w; b- U2 H. \; Z4 f3 [胞 集 落 ( SSEA- 1 阴 性 ) 与 多 层 叠 垛 集 落 的 ES 细 胞 ( SSEA- 1% n$ E: G4 g2 L, R6 f: o+ Q
阳性) 之间的差异。碱性磷酸酶(AKP)活性常被 用来作为鉴
- H8 p8 u6 `3 O8 P定 ES 细胞及其分化与否的重要标志。在早期 ES 中 AKP 活
) c; _0 U6 x# X6 f5 K3 l1 A; p5 n性较高, 而在已分化的细胞中活性明显降低。
! _: L9 W6 X( ^5 U! V
0 @! Z- T. m6 C2 X 转 录 因 子 Oct- 4 的 表 达 Oct- 4 是 一 种 发 育 全 能 性 的
0 p; G7 E& H4 w& T3 Z标志基因, 为 POC 区域的一个转录因子。在小鼠, Oct- 4 只限; D; v/ d% _, [9 R5 V; O
定在多潜 能 细 胞 中 表 达。
% F5 u7 J7 n4 P& g3 b1 H- D. p, `4 c
体内外分化能力 畸胎瘤和类胚体的形成 |
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发表于 2011-3-20 21:03
谢谢9 L& j: `2 `4 T. S: C
