求助：VPA

docqbzcn

想把骨髓干细胞重编程为ipscs,但是效率很低，所以想加入VPA，使得最终浓度为1mM，计算是加入0.16ul，这也太少了，不好加，教授让我先配置working solution，从working solution里、再加到6-孔培养板内，但是working solution如何配置？有知道的请指教一下，谢谢

docqbzcn

知道的帮一忙啊，谢谢

haixiaghx

我也做药物实验，我是先配浓度较大的浓储液,如100mM，再稀释成1mM。如果直接配成工作液就需要加大液体量了，2ml加0.16ulVPA,100ml就加入8ul了。不过100mM的液体要在一周内用完，如果可以就这样直接配工作液。我认为最好配成浓储液，配好后随时加入一定量就好了。浓储液用PBS配，不含血清或血清替代物，可以长期保存。

ada800515

问一下VPA在哪个公司买的？

docqbzcn

谢谢，从invitrogen买的

ghfvcat

回复 ada800515 的帖子9 a' _' U6 q3 X% G4 u. p

& s6 |# O; v0 o& I  Osigma有6 k# T' ^5 b0 a! q
working solution就是工作液啊，你老师的意思就是让你一次多配点吧？
+ {1 |( B' y; c7 Z* s" t$ O$ O一般市可以配成储存浓缩液的，但VPA不知道溶解度怎么样，你可以试试，用没加血清的纯培养基稀释为10X乃至更高，使用时再添加就行

ilulu1984

请教配制VPA浓储液（100mM）时，是用DMSO还是PBS或纯水溶解呢？我试过用水溶，但溶解度很低，因此用DMSO溶解，溶解度恰为100mM。0 T$ e" L$ k0 m* s- t
问题是，对于DMSO配制的VPA 100mM 浓储液，若想达到1mM工作浓度，则10mL培养液中应添加100uL浓储液。然而培养液中DMSO浓度超过0.5%会产生细胞毒性，此时培养液中DMSO浓度为1%，已经超载。若想降低培养液中DMSO浓度只能将浓储液用量减半，即50uL, 此时VAP终浓度为0.5mM. 许多文章中讲到VPA终浓度为1mM甚至2mM，但却没有讲到VPA溶解方法，苦恼中，特向高手求教！

snokey

把我的实验记录贴给你吧，照着配就行了，在我手里效果那是相当的好:)/ N* @, ^! B3 D- u, j
$ a. b9 v- p% [; H5 \7 e
Making VPA stock (250x stock)( v5 P& H3 M; }
MW: 166.2 g/mol = 166.2 mg/mmol 4 l! b6 W, p- U+ P
Working: 1 mM = 1 mmol/L = 1 umol/ml
* z6 u: k" \( D7 ^0 D) F+ b0.25 M stock: 0.25 mol/L = 0.25 mmol/ml = 0.25 * 162.2 mg/ml = 40.55 mg/ml
5 f7 D' o( _! j" o4 r  t. ^6 T2 ?+ b0 e3 b/ Q( `1 n
DMSO溶解度是比PBS好，但是能用PBS就用PBS，但PBS中VPA溶解度有限，浓度弄低点，多加点就是了。按照我的配法，一个6孔板的孔（2 ml 培养基）加 8 ul 就行了，操作也方便。* g- k7 Y, A' g9 X7 V, o/ O; j5 O
VPA尽量用新鲜的，每次少配点。我用的是calbiochem  676380  Valproic Acid, Sodium Salt, iPS诱导起来完全OK+ h6 L9 `# u& R  M8 b* _

ilulu1984

回复 snokey 的帖子
- w9 ~0 c3 k- n, K2 L* u
- a( y. |. ?) \* k太感谢啦！VPA溶解于PBS后再用0.22um滤器过滤，分装后-20度保存对吗？
+ B$ k, y/ H: G; X8 P新手上路哈，见笑见笑:)

snokey

所有做iPS的化学小分子药品我从来不过滤（除了Vc），在我手里没有污染过。不过滤，还有另外一个考虑：有些小分子是溶于DMSO的，滤膜也许会受影响的。-80可以放久点。但最好用新鲜的，我每次配个1-2 ml，100-200 ul分装，每次用一管，用不完就扔了。