干细胞冻存培养基

下雪了

在别人的帖子里看到你的回复说干细胞冻存配方是培养基：血清：DMSO=7:2:1，多次实验后效果不错！我想问那个培养基是没有加生长因子的无血清培养基，比如DMEM-F12么？还是加生长因子的，跟培养时用的一样的？谢谢~

下雪了

回复 下雪了 的帖子
2 R4 C: O3 w9 ]' M( A
, d' y& y! ?& q1 G7 {我培养的是胶质瘤干细胞的，其中要加一些生长因子，比如EGF 、FGF-2 、LIF  、Hepes、肝素等，不知道冻存的时候要不要加这些因子，还是直接加入DMEM-F12就好了？

冠忠

回复 下雪了 的帖子2 k/ Z3 M6 T% V  L' ^7 H3 S
% {3 o4 e6 r' x3 L
不用了，加了都没有用，浪费金钱。最好的冷冻液是: 6.8% DMSO (内有dextran40) + 93.2% FBS，我试过，基本上细胞死亡十分少。事实上，影响细胞活性最大的是降温方法，如果降温方法不好，细胞会死掉十分多。

fengxuechunyang

学习了
& Q% L& b) N4 J" Y, ^1 L1 C8 l- L( W/ z0 E

amosummer

回复 冠忠 的帖子- g2 }; Q% ?' C" V- W
: f* U5 T% ^8 z+ z* {3 H5 @
请问我能将细胞存放在你所说的培养液中，然后直接放-80度吗？还是需要一个梯度？

shen_coco

肯定需要降温梯度的，先在4度冰箱放30min至1h，然后-20度冰箱放1-2h，然后放-80，最后放液氮里

下雪了

回复 冠忠 的帖子# ^' {( V  L: N

9 N' l& p# L: @! f- `: R谢谢您的回复！请问“6.8% DMSO (内有dextran40) ”中普通的的DMSO中就有extran40，还是要新加入啊？另外FBS不会是干细胞分化么？

下雪了

回复 shen_coco 的帖子" A1 r' z# u4 h& `' B9 Q. k
" X8 I* S/ l3 J' G6 u3 [, l9 B1 n
您好！请问 我们有平时冻存细胞用的特制冻存盒，直接放-80就可以冻存普通的细胞。可以用它冻存干细胞么？

kostarcell

关于冻存液的成分我一般都是90%血清+10%DMSO,不用加因子。: r# e) l1 z  g, {' u/ J
关于梯度，我从来没有使用过，4度和-20这种梯度，放在冰里一会就转移到-80了，原理上冻存要慢，复苏要快，梯度肯定更好了。但也看你的时间和你的细胞情况。
  V% p0 q. R% G4 {" q% y冻存盒一般的足够了，用不着什么专业用来冻存干细胞的。我也没见过“不普通”的冻存盒。

下雪了

回复 kostarcell 的帖子
# b7 ^* U, X5 o/ p* M0 |
% Y4 J- y' R; U' X" R! g+ }哦 谢谢哦~~