干细胞冻存培养基

下雪了

在别人的帖子里看到你的回复说干细胞冻存配方是培养基：血清：DMSO=7:2:1，多次实验后效果不错！我想问那个培养基是没有加生长因子的无血清培养基，比如DMEM-F12么？还是加生长因子的，跟培养时用的一样的？谢谢~

下雪了

回复 下雪了 的帖子4 K5 U' D( L8 F5 h- n5 w- X  H3 G
) e9 W3 G# \$ D% D: {
我培养的是胶质瘤干细胞的，其中要加一些生长因子，比如EGF 、FGF-2 、LIF  、Hepes、肝素等，不知道冻存的时候要不要加这些因子，还是直接加入DMEM-F12就好了？

冠忠

回复 下雪了 的帖子, D7 w* N- g: Z! |/ _
0 `; e. M2 ~3 G+ V
不用了，加了都没有用，浪费金钱。最好的冷冻液是: 6.8% DMSO (内有dextran40) + 93.2% FBS，我试过，基本上细胞死亡十分少。事实上，影响细胞活性最大的是降温方法，如果降温方法不好，细胞会死掉十分多。

fengxuechunyang

学习了4 c6 M2 A% m: c

/ Y0 p: I) o5 Z; n3 V

amosummer

回复 冠忠 的帖子
) i5 x" h, c, s7 f
$ |& `6 ^; o: a1 ^, {2 d/ [9 w. p$ J" t请问我能将细胞存放在你所说的培养液中，然后直接放-80度吗？还是需要一个梯度？

shen_coco

肯定需要降温梯度的，先在4度冰箱放30min至1h，然后-20度冰箱放1-2h，然后放-80，最后放液氮里

下雪了

回复 冠忠 的帖子4 K$ J2 q7 T0 ?/ C4 E; y8 [
: e( n0 C& [% I. J; l4 E* U" X
谢谢您的回复！请问“6.8% DMSO (内有dextran40) ”中普通的的DMSO中就有extran40，还是要新加入啊？另外FBS不会是干细胞分化么？

下雪了

回复 shen_coco 的帖子
; S' [/ K+ c+ h. O
1 S% a! w+ q2 d7 k5 k- i您好！请问 我们有平时冻存细胞用的特制冻存盒，直接放-80就可以冻存普通的细胞。可以用它冻存干细胞么？

kostarcell

关于冻存液的成分我一般都是90%血清+10%DMSO,不用加因子。
6 n6 c2 ^1 A. d- s3 N9 U% C关于梯度，我从来没有使用过，4度和-20这种梯度，放在冰里一会就转移到-80了，原理上冻存要慢，复苏要快，梯度肯定更好了。但也看你的时间和你的细胞情况。& j( W) j- s4 N$ Z+ m# ]* J
冻存盒一般的足够了，用不着什么专业用来冻存干细胞的。我也没见过“不普通”的冻存盒。

下雪了

回复 kostarcell 的帖子0 J) N* x3 U" N+ s5 N# C# n
& g5 p1 i& O, E; E# o
哦 谢谢哦~~