紧急求助各位大侠有关实时定量疑问 有图

scienese

模板是三个早期胚胎  跑电泳有目的条带  但是荧光强度——温度曲线不呈典型的S型而呈抛物线型- N* ~; W  V! n
请高人指点  呵呵呵
/ m) m+ T8 x" k& [- z试剂盒买的TAKARA的4 [' G8 R1 I4 C# J3 l

scienese

回复 farmer 的帖子
: `$ {# N8 v6 J6 }
1 J0 q/ v; u7 X/ Y& U？？？2 g: B: n& L, j' l6 w

farmer

标记

scienese

这是我用稀释十倍的模板做的  效果不错  呵呵

scienese

回复 aminhair 的帖子
! `* A, S3 w5 H: B- c4 w* E* I7 z) v& K6 p: b! Y
首先感谢各位大侠的帮助  我已经找到问题的原因了  模板量太大了
1 n; P6 \* u1 i! r' C1 D$ M3 z我做了10倍和100倍发现结果变好了  有机会会把图上传的) H: m5 G' F! h8 v0 ~
还是要感谢大家

aminhair

就是模板量太少了吧。

scienese

这里有补加DMSO和补加Mgcl2的   给位大侠请指点

scienese

8 `4 N5 B# q6 {& b) x
9 S+ k/ I- J) d  G
回复 gact 的帖子
: B6 L% }- b; K  m9 C4 `2 }6 s9 Y3 Y  T9 B
RNA用invitrogen的盒子提的（货号：18080300）
- S! g% {. w! H2 yQpcr用的两步法

scienese

回复 runsong 的帖子4 Q* \, Q; A4 X* W: M7 v

" D' e9 o/ {0 O( |' d% U7 Q 体系中没有家DMSO  以前加过 但效果不明显 没有加Mgcl2好
/ i% f! V7 N: p/ A0 B2 Y跑电泳只有目的条带

gact

回复 runsong 的帖子( o+ @- \" P) e; c

5 a. [6 Q& z9 X2 Q+ c非常规的方法？
, w! ^  [. h! x7 X. \+ V具体怎么提取RNA 和 QPCR？