小鼠骨髓间充质干细胞

bathpp2007

liuxiao2006 发表于 2011-6-24 11:05 - w# L9 |0 m4 v. }& v
我用的是DMEM/F12的培养基加上进口胎牛血清（10%），细胞长势很好啊。可能与细胞株有关吧，我用的是纯化过的 ...

$ {, |" j# s3 p' D$ N6 i( J6 @是小鼠的吗? 如何纯化的呢？
5 v7 n& N* C4 @请指点

bianhuimou

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6 D4 i; b( z  L5 K& c
8 Z3 F* J% d2 R& D+ a# N我用买的stem cell  的培养基都没有养成功，感觉细胞很容易分化，不知您是否能提供你的培养基和血清的货号？我想试着再养养

bianhuimou

回复 xiaoyurly 的帖子6 n' h$ ^- ?% S, {5 L

5 s( F7 a! ]0 i+ k- a2 g# [) h* {您好，请问您用的培养基和血清的货号能提供吗？

xiaoyurly

如大家所言，小鼠MSC确实很难养出来，对血清要求高、纯化难且容易老化。
$ E! z5 D/ l! J: @, Z/ S我用4-5周龄的C57小鼠培养，2只小鼠的全骨髓放1个10cm盘，用20%FBS+αMEM培养基。3天时换全液，此后每2天换液，5天时即可看到有克隆长出，一般7天时可传代。传代时胰酶消化时间要严格把握，随着传代杂细胞（主要是CD45+ HSC）会逐渐去除。到5代时MSC比较纯可用于后续实验（如分化、移植等）。
) C& L4 e2 `3 y- |
/ D) t% ]( M5 q4 E' t/ n! X, B. ]8 e分离骨髓时用无菌纱布剥离肌肉，放在研钵里轻轻用力将骨头研碎，这样比较省时省力。6 Z5 s7 c9 B8 Z# U3 L* S$ M: Y5 _# I" y
ps. 曾经养过balb/c小鼠的MSC，私以为比C57的难培养一些。

细胞海洋

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% w  y. T4 ]% v) j& @( {
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bianhuimou

回复 sping 的帖子
) U1 Z) O' ?. E" ?# M7 u- u
6 i! y; U( e) r您养过小鼠MSC?我用stem  cell 的培养基都养不出来，请您指点一下！

皮搋子

请问骨片法培养的是间充质干细胞吗？
* s$ l2 e, A5 x$ |+ r) \( n+ V8 k

viv2005

我做rat的，小鼠的没做过，不知道我的protocol有参考价值没，感觉MSC是最好培养的了，比什么osteoblast和osteoclast好养多了
+ z8 y! J8 H6 _& L- H8 g4 }
1 O9 Z! q# V; S6 {$ K, L4 ?MSC  Isolation from Rat Femur and Tibia4 ?+ Y3 r: S' ^9 B$ l* |0 l$ m+ ~
1.        Euthanize the rats with CO2 for 5 mins.
  C' y! z: j. d* A. ^9 |2.        Isolate femur and tibia by disconnecting them at the joints.# [+ |2 y, w- O' C
3.        Clean the bones of soft tissues.
0 L6 H- m% w2 b- s) |; Q. U4.        Wash both femur and tibia in PBS containing 1% penicillin/streptomycin twice.
5 u2 P  ?& l2 g+ ]( Q5.        Under the cell culture hood, clip-off the epiphyseal plates to expose the bone marrow.; k$ m% H- x- ^2 R$ S
6.        Using a syringe, flush the bone marrow with 10 ml of media into a dish." p4 `3 j' E1 r; i5 g7 ]  _
7.        Break up the clumps by aspirating the cell solution multiple times.
1 {- H* L0 D& ~; C8.        Using a 70μm cell strainer, filter the cell solution into 15ml tube. This will remove any unwanted debris and bone fragments.4 R$ c6 \0 `$ p, k: ~
9.        Centrifuge the filtered cell solution at 1000rpm for 10 min., e% O# Z$ g* d- X+ s: A- C. f. L
10.        Resuspend the pellet and pipet this solution into a 100mm dish.6 v  S. s& g0 V' X  A* u
11.        Incubate for the next 48h.
* j. X  v/ C% G12.        Change media to remove non-adhering cells.
9 `+ |5 t0 L5 y* k( @* D) G13.        Change media every 2-3 days, even the media doesn’t change the color.
8 @( ?, q8 ^* G3 a8 Y0 V5 K14.        Usually the cell will be confluence at 7-10 days, and then are ready for passaging.5 d6 d* q# w+ c' n/ D8 U' f

clairezy1983

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% O" e# S, `( ?" T$ J
) h0 K6 i# X% b& K* B& ?5 ]! ~我现在都是做人的脂肪来源的MSC，没有做鼠的呢。我是做成脂成骨诱导。

bianhuimou

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6 e2 i3 T& G. x) O" N1 A" ~( `3 a7 Y6 W6 [6 f# o: I" F
我最近进行诱导分化可是总是不成功，您有经验传授一下吗？