小鼠骨髓间充质干细胞

bianhuimou

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7 W, t1 A- o' e. _
; d( v$ e: `# b  w$ V大胆的降！哦，我试试，这个细胞太难养了

clairezy1983

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* N( L. l/ M7 P, r5 f" }7 x: C$ O3 ^  g; g, K) ^) o4 M* s
浓度有点大，降，大胆的降哈

bianhuimou

恩，胰酶浓度0.25%，消化两分钟，我之前养出来一瓶可是之后就再也养不出来了。

clairezy1983

回复 bianhuimou 的帖子5 C& p  B$ k! x
* X7 U, y- L3 X; A7 A4 O. Q8 Z6 ?
恩，你试着降低胰酶浓度，和消化时间，不要期望把所有细胞都吹下来，很多细胞消化不下来的都不是MSC哦。

bianhuimou

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: U' v4 h0 |5 v" Z6 w0 w: Y1 M$ a' l) s5 p9 u# I9 S; [# ?
是的，骨片法原代法可以看到放射状爬出的MSCs,可是传代后细胞形态变化的很丑，乱糟糟的。

liuxiao2006

我用的是DMEM/F12的培养基加上进口胎牛血清（10%），细胞长势很好啊。可能与细胞株有关吧，我用的是纯化过的细胞株，大概3天就要传一代

clairezy1983

回复 bianhuimou 的帖子6 ?" M( i' r2 M$ [- d/ p
/ H& R2 N  J# b
小鼠的MSC形态跟人的没法比，人的MSC形态比较规则，看起来挺整齐，小鼠的MSC样子挺丑的。我已经很长时间不养小鼠的MSC了，现在主要做人的。
; A6 v! ^+ q1 g- O! A1 N3 ^( b你用骨片法的时候要把骨片一起种到培养瓶里，放入孵箱之前，摇晃均匀，最好三天都不要动它，可能要更长时间细胞才能长满，然后你会发现从骨片周围爬出很多比较整齐的MSC，有的时候呈放射状。你要是总是不同的观察，骨片就飘走了，不利于细胞的爬出。- l7 R& X. B. [- S
他们公司的protocal里面说的还要过滤，这一步也是省略的，因为要直接把骨片弄进去的嘛。
; G9 }/ T6 Z  O: c5 i, K6 f还有碾磨的时候一定要动作轻柔，垂直用力，而且要轻，只要把骨腔打开，让血液出来就好，千万不能左右摩擦。
3 T% u# c* f, Y. U# k( Y- O碾磨之后冲洗的时候也得温柔点，我有一次就是冲洗过度，洗得很白净，但是干细胞也没有，那些红红的血水去掉就好了哈。7 _8 P1 O" Y1 O  ^
传代培养的时候密度最好大一点，还有不能消化过度，很多消化不下来的细胞根本就不是MSC哈。据我的经验，MSC很好消化。
! [# B4 L2 M' u, I7 R暂时就想到了这么些，希望对你有所帮助。

bianhuimou

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& o: t/ S' F) U4 o
8 J, f; ^6 w4 J5 j7 K0 z您好，我也用该公司的小鼠MSC培养基采用骨片法养细胞可是，还是不理想，细胞老化形态改变很大，想请您介绍下你的心得，感谢！

bianhuimou

哪位用的stem cell 公司的培养基并且应用骨片法养小鼠MSCs呀，能介绍下宝贵经验吗？我养了一年了，可是还是养不出来

open1230

用3-4代的间充质干细胞，10代以上的话形态就不好了！