小鼠骨髓间充质干细胞

smilewpp

我养的也是。。形态很多，有看到类似的间充质干细胞形态的，也有圆形的，怎么纯化的？( w8 f. B4 ~6 ]8 q0 I3 S* g6 u( W! s

alioli

培养小鼠MSC，培养基很关键，stem cell公司有mouse mesenchymal stem cell 培养基出售，但是比较昂贵，三千多才500ml，而且成分保密，不知道是否添加了什么因子。 如果用一般培养基的话，血清尽量选进口的胎牛血清，比如Gibco的，国产的效果不佳。' X! D' @. G2 l& Y4 a. s. v
另外，以我的经验，楼主上面的细胞还没有达到传代的标准，应该要等细胞形成较大集落并且集落间开始融合后才能传代，否则一是消化是很困难，很多细胞贴壁消化不下来；二是得到的细胞状态不好，生长迟缓。

honey.joanne

    可以用全骨髓贴壁法从小鼠骨髓分离培养出 MSC，在体外进行有效扩增；
9 ^* `1 i* T+ _* xMSC的传代培养 ：) Z$ @8 p+ h' |* i
   原代细胞生长达80%~90%时，吸净培养瓶中的液体， PBS洗涤 2次，取 37℃预热过的 0.25 %胰酶 3~4 mL，于 37℃恒温水箱内消化 1 min。镜下观察细胞见细胞从梭形变为圆形，以 10%胎牛血清的 DMEM培养基终止消化，吹打细胞，使细胞完全从培养瓶中脱落并吹打成单细胞悬液。吸取细胞悬液至 15 mL的离心管中， 1 000 r/min离心 5 min，移去上清，见离心管底部一层白色沉淀，加入 DMEM培养液，制成单细胞悬液。原代细胞按 1:2比例传代培养。传代后的细胞继续按原代培养的方法培养，直至下一代传代。共传代 3次

zxdlala

基本上每个克隆里都有几片这样的暗区，可能就是该传代了吧

zxdlala

我觉得细胞长得还不太满，也把它传代了。还不知道活的怎么样，下午去看看，希望他能活的很好吧

zxdlala

, a9 M; x. [, C第十天，细胞不太好了，一起养细胞的说是中间密度太高挤死了，我也不知道怎么回事，发上来大家看看吧" |  `! m! v2 `% H6 D

若兰汀

小鼠骨髓间充质干细胞培养需要额外添加细胞因子，可防止老化，stem cell 公司有售,具体名字我忘了，回去找找。

zxdlala

回复 sping 的帖子! _1 c/ \% F  e- U
2 J1 ]0 B$ E% d3 v; [: t
你好SPING，我也用的F12，全骨髓贴壁法，但是36小时首次换液后细胞还是圆的，怀疑是没贴壁，不知道怎么回事，你遇到过这种情况吗？

bianhuimou

有养出小鼠MSC的朋友把细节说说吧，实验进行不下去了，感谢大家帮忙

bianhuimou

低糖DMEM+10%FBS也试过，也养不出来，细胞很杂，不易纯化，而且细胞很易分化