小鼠骨髓间充质干细胞

皮搋子

请问骨片法培养的是间充质干细胞吗？, e1 t1 n& N- `% q5 T0 y. N

bianhuimou

回复 sping 的帖子
( R* x$ Z4 w2 I/ }0 l, \& }) ?
0 D7 P# J0 R# e# P5 q您养过小鼠MSC?我用stem  cell 的培养基都养不出来，请您指点一下！

细胞海洋

回复 bianhuimou 的帖子1 M5 K3 o5 @; u7 P$ j$ F

7 X9 H4 r  }) W& k2 `, H  U建议你详细说明你的问题 发新帖提问

xiaoyurly

如大家所言，小鼠MSC确实很难养出来，对血清要求高、纯化难且容易老化。6 @9 l0 m  u" [  @, P) L5 T
我用4-5周龄的C57小鼠培养，2只小鼠的全骨髓放1个10cm盘，用20%FBS+αMEM培养基。3天时换全液，此后每2天换液，5天时即可看到有克隆长出，一般7天时可传代。传代时胰酶消化时间要严格把握，随着传代杂细胞（主要是CD45+ HSC）会逐渐去除。到5代时MSC比较纯可用于后续实验（如分化、移植等）。8 K( y& b9 Z' x

% P3 B8 `) L7 g; v分离骨髓时用无菌纱布剥离肌肉，放在研钵里轻轻用力将骨头研碎，这样比较省时省力。
, g1 j$ u9 J% |7 J, L8 k+ \ps. 曾经养过balb/c小鼠的MSC，私以为比C57的难培养一些。

bianhuimou

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9 x0 _- h6 {4 }% {4 w0 l" Q) J) N& W0 M% T. k8 |
您好，请问您用的培养基和血清的货号能提供吗？

bianhuimou

回复 xiaoyurly 的帖子- H$ t3 z7 x1 d& F' G. E

! n  [8 N. {8 r* u* `我用买的stem cell  的培养基都没有养成功，感觉细胞很容易分化，不知您是否能提供你的培养基和血清的货号？我想试着再养养

bathpp2007

liuxiao2006 发表于 2011-6-24 11:05 " k1 m  j1 E* A/ a
我用的是DMEM/F12的培养基加上进口胎牛血清（10%），细胞长势很好啊。可能与细胞株有关吧，我用的是纯化过的 ...

  ?4 L1 k. N' T2 M% }2 j$ z是小鼠的吗? 如何纯化的呢？0 z/ k; F+ d6 ?6 H
请指点

asejon

/ F& P/ g' o! H6 c! S
, |5 }8 t) y. W1 R8 X回复 clairezy1983 的帖子& ?! z! Z6 D* @, x, l* M, g) H
/ n6 W+ w' H8 d% Z; A. a; t
以前还真不知道可以用胶原酶I溶液消化骨片提取间充质细胞，见识了，但是不是会混入骨细胞呢？会不会诱导干细胞成骨分化呢？

clairezy1983

回复 asejon 的帖子
: p! P" z" q$ n& [* {2 ^, O# g. m7 Q/ [, M4 K
不会，培养基没有适合成骨分化的条件啊，骨细胞更不会吧，我觉得那些干细胞应该是从骨膜上爬出来的

asejon

成骨细胞也会从骨片中爬出，这是获取成骨细胞的方法，如果成骨细胞跟间充质干细胞一起培养，成骨细胞必然会分泌物质而调节干细胞向成骨方向分化