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慢病毒载体上一般会有tet抗性基因，可以通过Dox筛选？! A" b5 Q8 [4 i" r% o7 Y% U# J
Dox怎么开启外源基因表达的呢?7 L# q! \6 b, X9 |0 }: \
pTet-On基因表达系统是1992年Gossen等设计的一种受四环素调控外源基因表达的高效真核表达体系，该系统有两种表达质粒即调节质粒和反应质粒组成, 5 D% A$ \" O, K8 y" W2 G
调节质粒可表达一种融合蛋白称四环素反应转录活化因子(Tetresponsivetranscriptionalactivator,tTA), 该因子可与反应转录的四环素反应性元件(Tetresponsiveelement,TRE)结合。
5 h4 }2 [8 c8 G在没有四环素(tetracycline)或其衍生物强力霉素存在的情况下, 引起插入启动子下游目的基因的高效表达。
& ]8 X/ P2 L3 xpTet-Off，相反，随着四环素浓度的增加, 基因的表达以一种剂量依赖性的方式逐渐关闭直至为零。
: o/ v% i" ]8 L5 }( ~ V7 o$ K5 n诱导倍数按下列公式计算:诱导倍数=+Dox/-Dox诱导倍数>20者为高表达克隆。5 M4 P$ v% B+ s& w2 Y
% @6 o! G* D: P) V) b
5 q2 ?0 v. _1 h3 F) T# ]% n1 E8 `$ l最近看了一篇文献（Matthias Stadtfeld.Induced Pluripotent Stem Cells Generated Without Viral Integration,science,2008），利用的似乎不是利用病毒载体做的，而是利用Oct4-IND的等位基因可诱导转录激活做的，很迷惑，求解答。 |
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发表于 2011-4-11 16:25
发表于 2011-4-12 19:04
