如何提高细胞消化后的活度，请大虾们指教 - 实验室综合讨论区干细胞之家

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luoye1986

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帅哥研究员

楼主

发表于 2011-4-21 15:31 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

我培养的间充质细胞生长状态良好，增殖速度也正常，但是在用胰酶消化后其活度大大降低，请教大侠们是什么原因，有什么好的改进方法吗？谢谢！！

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HMC

新手上路

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沙发

发表于 2011-4-21 15:50 |只看该作者

看看你的胰酶浓度是否过大，或消化时间过长

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luoye1986

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帅哥研究员

藤椅

发表于 2011-4-21 16:13 |只看该作者

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胰酶0.25%，3分钟左右吧

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tigerfish

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板凳

发表于 2011-4-21 16:47 |只看该作者

减少消化时间，一般用3分钟就够了，建议每隔一分钟在显微镜下面观察一下3 [4 Q0 b' z5 g7 F" n3 A) L
另外使用量也是，比如我T75一般用3ml，T175一般用7ml，只要保证能完全覆盖细胞附着表面就行了。4 y$ [" }& o1 z: t* [! [) M* V$ X
消化完之后要用大量的带FBS的培养液中和trypsin，我一般用12ml的培养液中和3ml的trypsin
另外有时候细胞几乎已经被消化了，只是还有些粘着，你只需要轻拍培养皿侧面就可以把细胞震落下来。
另外就是换用invitrogen的TrypLE™ Express,比trypsin EDTA性质更温和，效率更高。

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wzx6660

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报纸

发表于 2011-4-21 17:08 |只看该作者

学习了

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zhangyan813

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地板

发表于 2011-4-21 18:27 |只看该作者

酶消化最重要的两个影响因素就是：作用时间和作用力度。我建议你一是减少作用时间，加了酶之后每隔1分钟就在显微镜下观察一下细胞的情况，如果大部分贴壁细胞已经变圆，就应该立即终止作用时间，有的细胞这个时间可能仅需要1分钟；另一点很重要的就是在操作过程中一定要注意你的手法，千万要温柔，将终止酶消化作用的细胞轻轻的吸起来，轻轻的吹下去，这样反复吹打几次，基本上就可以把所有的细胞都收集到，而又不至于影响细胞的活力和活性。