关于mESC传代密度与其细胞状态维持的问题

almasun97184

7天是有些久，太久了饲养层细胞都状态不好了，容易分化。
) q9 X# K6 D' l, o& H3 i7 W' q0 ^我养mESC也是一般1：10，3－4天传代一次，细胞状态挺好的，基本没有分化。2 O/ R' D8 A" t0 i) P- B
如果分化细胞多，最好挑选好的集落传代，或者减少消化时间。ESC容易消化而feeder以及分化细胞稍微难一点。
5 s) B  B. {; H血清浓度一般都是20%。
9 K5 T4 p  z/ G) V为什么你不按照标准操作规程，而要用不被广泛承认的操作方法？到时候写文章都不好写呀，后续试验的结果也不可信。

almasun97184

7天是有些久，太久了饲养层细胞都状态不好了，容易分化。
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如果分化细胞多，最好挑选好的集落传代，或者减少消化时间。ESC容易消化而feeder以及分化细胞稍微难一点。  n* }) {! i( v; D0 S
血清浓度一般都是20%。
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almasun97184

mESC无feeder培养加足了LIF养个三代还好，久了就有分化的了，实验结果不可靠。一般还是用feeder维持，做实验之前用差速贴壁法去feeder。方法通常为全部消化下来，tip头吹打成单细胞，在明胶上贴壁一小时，feeder会在一小时内贴壁，洗掉未贴壁细胞，为较纯的mESC。
7 t2 ~1 S1 V$ D1 x3 a  p( `mESC较容易消化是经验之谈，没有在文献上看到过。以上的差速贴壁法其实也证明了mESC的贴壁能力更弱。: D3 b2 K0 X/ O8 W3 o: O0 }* B
回7ubo：其实消化时间相差不多，用tip一吹都散了。另外也不是ESC一接触就分化，没这种说法。只是当ESC克隆开始相互接触，说明皿里的细胞量已经非常多了，培养基很容易变黄。对于这样快速生长的细胞，一天换液一次都不足以维持它们的营养，营养不够自然容易分化。
: m+ Q# c/ u( K6 m5 b1 y请问dilal：我没想明白为什么mESC要用无feeder的方法培养？状态又不好，又费LIF。hESC还想得通。