iPS细胞的传代

ly200101042

我用的是胶原酶IV，室温消化5min后，吸走胶原酶，采用iPS细胞的培养液终止，洗一遍后，用枪头轻轻吹，吹下来的全都是MEF细胞，这个是为什么啊，我的iPS克隆还在板上呢啊，这个是怎么回事啊
3 D. f4 k9 Q) {6 g" n3 A3 e我是新手，希望吧里的各位兄弟姐妹多多帮助！:handshake

gact

你已经诱导成功了？& d2 `) W1 u% k' k) S1 O

SCNT

用PBS洗涤了吗？

christophe

因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清不影响胶原酶IV的活性，无须终止，直接吸弃即可；$ {7 x* {/ j* E9 Q  g  }* g8 e
如果还是消化效果不好，可以再用0.15的胰酶（之前用PBS洗一下）消化1-2分钟，然后血清培养基终止反应，在用枪头吹打一下基本上就能分散开了。

ly200101042

SCNT 发表于 2011-5-15 08:58
! v% U5 ^6 L; r, C/ }5 ~用PBS洗涤了吗？

! {7 y1 }: D, c洗了啊

ly200101042

christophe 发表于 2011-5-15 12:22 ) \, |7 c" n0 T( }# y5 j5 }. R
因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清 ...

# o1 [" B# y- A9 f, o1 C呵呵 还行请教下您啊6 y$ A. e7 G5 y* z
那MEF细胞也一起下来了啊  R2 [  M" S0 w5 S
为什么我觉得我iPS细胞比MEF贴壁牢呢啊

ghfvcat

胶原酶IV，室温消化5min？
$ ~' A7 J8 y% ]7 ?时间这么短就能消化下来啊，是小鼠的？好奇怪，消化人的时候一般都要消化上大半个小时的。

牙牙丫丫123

一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……9 D6 r( L# |( k: p  p

ly200101042

回复 ghfvcat 的帖子# E  V" M# x* O5 p

/ ^. h$ N( `8 J$ n- i* }; |为什么那么长时间啊
. D% f* L8 _) ~( [8 }/ q6 Y$ g您是说分原代还是已经培养若干代了吗

ly200101042

牙牙丫丫123 发表于 2011-5-15 17:50
; V8 v; i- J: n7 a/ q一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……

1 I2 W( g) r6 J8 W/ i
我用的是1mg/ml 应该是1%的吧