iPS细胞的传代

ly200101042

我用的是胶原酶IV，室温消化5min后，吸走胶原酶，采用iPS细胞的培养液终止，洗一遍后，用枪头轻轻吹，吹下来的全都是MEF细胞，这个是为什么啊，我的iPS克隆还在板上呢啊，这个是怎么回事啊6 M$ q+ x  P, s5 _
我是新手，希望吧里的各位兄弟姐妹多多帮助！:handshake

hansey

消化时间太短，一般是每5min左右在显微镜下观察细胞的变化，待克隆的细胞之间出现明显的小裂缝后，终止消化，然后再用枪将克隆吹下来

牙牙丫丫123

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8 e- ?) I' d3 P* G恩，你用的那个浓度比较大了……一般使用的都是0.1%或者0.5%的，这样对ips细胞损伤小，而且还不会因为过分吹打把feeder吹下来

细胞海洋

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0 t! _2 w7 H% U' j/ D; |
有问题 请直接在论坛讨论

ygplay

christophe可以加我的qq 吗？希望得到指教。

ly200101042

st_oliver 发表于 2011-5-15 23:20 * ~2 a6 Q1 ~' d, @1 f
不同的iPS克隆，由于其重编程的程度不同，或者即使是完全重编程的，不同的物种，其iPS克隆的贴壁性也有很大 ...

- a; K+ @2 i$ i/ k8 y8 p恩 学习了啊 谢谢

ly200101042

genedu 发表于 2011-5-16 01:47 , t+ U( q! Q" i7 O' `/ e* l( y4 Q
你用的那个浓度消化5min根本就不行，你最好设计个时间梯度，过五分钟看看，这样就能找到一个最好的时间点， ...

6 W) S+ Y$ p& W  N呵呵 谢谢 我再试下

ly200101042

ghfvcat 发表于 2011-5-16 09:20 * a9 j' j1 O& @/ D
回复 ly200101042 的帖子: o: `" [  @- k% \9 Q4 A
" p2 R) s5 C+ @# j, j' ?
哪一代都是啊，原代的时候是挑的，没有用酶消化，传代的时候，大概都要消化上30- ...

2 M- ]* C# r0 C/ X7 E/ n
我消化5min确实消化不下来啊，我还得用枪头去刮，但我觉得我的操作太暴力了，细胞全都被我弄分化了啊。

前途似锦

我消化ES用 trypsin 有时集落先消化下来，feeder后消化下来

ghfvcat

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: L) X4 h9 A/ y6 P4 z5 R7 [* ]# Z) P0 q
哪一代都是啊，原代的时候是挑的，没有用酶消化，传代的时候，大概都要消化上30-60min的，毕竟不是胰酶啊，小鼠的话，用胰酶消化，估计才不用五分钟，
; E) e" \/ G% r: b( v" N我还不曾看见胶原酶五分钟就能消化下来的情况，额，难道是我买的胶原酶是伪劣产品？8 I$ w( O+ [- S' M9 G+ w6 Z) Q
你再确认一下，胶原酶Ⅳ,1mg/ml，hiPS ？
; p) _" ?0 k  G- [1mg/ml 应该是0.1%