iPS细胞的传代

ly200101042

我用的是胶原酶IV，室温消化5min后，吸走胶原酶，采用iPS细胞的培养液终止，洗一遍后，用枪头轻轻吹，吹下来的全都是MEF细胞，这个是为什么啊，我的iPS克隆还在板上呢啊，这个是怎么回事啊
/ R# Z7 `4 L0 {) B- ^% W我是新手，希望吧里的各位兄弟姐妹多多帮助！:handshake

gact

你已经诱导成功了？$ d2 `  }0 ^# w2 w  G$ |

SCNT

用PBS洗涤了吗？

christophe

因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清不影响胶原酶IV的活性，无须终止，直接吸弃即可；
; Z% _. f- o$ ~1 i) a如果还是消化效果不好，可以再用0.15的胰酶（之前用PBS洗一下）消化1-2分钟，然后血清培养基终止反应，在用枪头吹打一下基本上就能分散开了。

ly200101042

SCNT 发表于 2011-5-15 08:58 2 H* a( F. U2 ~# C2 x
用PBS洗涤了吗？

6 X7 L- j* p8 Z. x$ N: m2 k洗了啊

ly200101042

christophe 发表于 2011-5-15 12:22
  R( X. [9 y; Y% O( D/ I9 S因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清 ...

) e/ g: G, z0 R) e( V  I, |8 ^呵呵 还行请教下您啊7 y0 }  _0 u- T8 L* {) r0 f( u5 ]
那MEF细胞也一起下来了啊
  h, p$ o! e8 U( W3 R  T9 Q为什么我觉得我iPS细胞比MEF贴壁牢呢啊

ghfvcat

胶原酶IV，室温消化5min？
% a9 V8 z1 Z  k  w/ [4 M1 b时间这么短就能消化下来啊，是小鼠的？好奇怪，消化人的时候一般都要消化上大半个小时的。

牙牙丫丫123

一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……2 s! t! E" c% s. e3 B: V, B

ly200101042

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0 |+ B2 B( C' Q# L# ~' v0 N1 F2 ]; e
, P6 x. T6 i) {9 x5 K& @$ G" v5 |1 j为什么那么长时间啊
( T+ e5 F6 O& O% |& m您是说分原代还是已经培养若干代了吗

ly200101042

牙牙丫丫123 发表于 2011-5-15 17:50 , N; Z7 o0 `1 R- j; K* Y2 N- z
一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……

; s& h6 t+ `! w9 b0 F& _
我用的是1mg/ml 应该是1%的吧