iPS细胞的传代

christophe

回复 ly200101042 的帖子8 [* M+ @9 l4 j3 y+ `2 R* H
& A3 ?( ^8 ~- I% z6 W
MEF铺展的比较开，而ips克隆较为致密，所以MEF应该比IPS较容易消化下来吧。
2 J& F: k! F& o7 i# Q! H1mg/ml就是0.1%的，1mg/ml=100mg/100ml=0.1g/100ml=0.1%

ly200101042

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+ |$ D8 O. ?( J, D5 \( e
: q' _5 \& }+ Z. e( b( R呵呵 好的啊 谢谢 楼上

st_oliver

不同的iPS克隆，由于其重编程的程度不同，或者即使是完全重编程的，不同的物种，其iPS克隆的贴壁性也有很大的差别，并不是笼统的多少分钟，需要根据你的诱导的细胞的情况来看，消化的经验，快的有5min，慢的有1个小时，甚至几个小时的。还有，胶原酶消化，不需要用血清培养液中和，你可以感觉有部分克隆飘起来的情况下，敲敲皿壁，只要大部分克隆下来就行了，有枪吹是最后的选择，一般多消化会，敲敲基本就行了。呵呵，最后祝你实验顺利噢！

genedu

你用的那个浓度消化5min根本就不行，你最好设计个时间梯度，过五分钟看看，这样就能找到一个最好的时间点，以后做实验的时候自己心里也就有底了

ghfvcat

回复 ly200101042 的帖子8 n2 O/ S; n1 j' X9 S

! d; @+ B# j) L; I% _* L哪一代都是啊，原代的时候是挑的，没有用酶消化，传代的时候，大概都要消化上30-60min的，毕竟不是胰酶啊，小鼠的话，用胰酶消化，估计才不用五分钟，9 }7 p& l) b3 y
我还不曾看见胶原酶五分钟就能消化下来的情况，额，难道是我买的胶原酶是伪劣产品？2 w; Q4 H3 ?7 R& R; P4 k/ W
你再确认一下，胶原酶Ⅳ,1mg/ml，hiPS ？
" T* h# [9 f' d; j! ^; {1mg/ml 应该是0.1%

前途似锦

我消化ES用 trypsin 有时集落先消化下来，feeder后消化下来

ly200101042

ghfvcat 发表于 2011-5-16 09:20 6 H) Z) G! @& }' s! |' r2 D1 X& e# L
回复 ly200101042 的帖子
$ S7 x6 Q4 a% a" o  V3 H% C. T4 \1 l8 \( h
哪一代都是啊，原代的时候是挑的，没有用酶消化，传代的时候，大概都要消化上30- ...

6 x! h! o/ s9 i' g我消化5min确实消化不下来啊，我还得用枪头去刮，但我觉得我的操作太暴力了，细胞全都被我弄分化了啊。

ly200101042

genedu 发表于 2011-5-16 01:47 ) x$ \6 Z) X4 Q! x& ]' O
你用的那个浓度消化5min根本就不行，你最好设计个时间梯度，过五分钟看看，这样就能找到一个最好的时间点， ...

  V) w7 j' X" y3 O5 I) @/ u
呵呵 谢谢 我再试下

ly200101042

st_oliver 发表于 2011-5-15 23:20
' S; i9 c" @& M! J+ ?8 Y不同的iPS克隆，由于其重编程的程度不同，或者即使是完全重编程的，不同的物种，其iPS克隆的贴壁性也有很大 ...

( y- i: H6 Y1 F8 A4 u1 s
恩 学习了啊 谢谢

ygplay

christophe可以加我的qq 吗？希望得到指教。