参加2011年6月3日同济大学干细胞技术临床转化应用讲座的一点体会：

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1.        本次参会人数约200人左右，共14位专家进行演讲。人胚胎干细胞两人：金颖、孙毅；组织工程学一人：曹誼林；细胞表观遗传2人：唐九红、沈晓骅；iPS三人：周琪、裴端卿、肖磊；MSC一人：赵春华；干细胞定向分化两人人：邓宏魁、赵旭东；肿瘤干细胞两人：卫立辛、钱其军；干细胞临床治疗一人：栾佐。
" j/ Z9 ?$ m  H( |  C3 p2.        本次讲座新东西有限，多是已发表的文章，且部分演讲者已反复演讲相同题目多次。有些演讲者是在给本科生上课，从最基本的讲起，对于一些从事干细胞多年的人士可能会感到不适应：花时间和经费是来听新东西、开阔思路的。
* m: {9 T/ g. i# `9 r7 H( L+ u! z3 J3.        至少三位演讲者提到的概念：totipotent stem cell:全能干细胞（8细胞前），pluripotent stem cell：多能干细胞(ESC)，multipotent stem cell：多能干细胞，unipotent stem cell or progenitor cell：专能或少能干细胞。
- o7 O# {5 |2 r4 C1 u# U) |4.        裴端卿报道从小便中提取细胞来制备iPS细胞，原因是有些人不愿意抽血。有必要从小便中提细胞吗？他再次提到维生素C的文章，对他的思维方式和思路感到敬佩。& ?  H9 v/ i4 s- s
5.        赵春华提到MSC具有抑制肿瘤细胞的能力，但卫立辛报道MSC是肿瘤微环境主要部分，促进肿瘤发生、发展。不知矛盾的原因在哪里？' m) e$ b! t# B  L
6.        赵春华认为不同的疾病原理不同，不能完全用MSC治疗，如MSC治疗能加重自身免疫性关节炎。干细胞治疗要主要移植时间窗的选择，需注意在什么时间用干细胞治疗最合适的问题。1 F' S) n' O+ G7 u1 Q  R
7.        卫立辛推荐肿瘤领域的一篇综述，发表在今年3月Cell上。从干细胞之家下载需48个包包（共6部分，每部分8个包）。我全部下载该期杂志后提取该篇综述，供大家参考，应至少省下40多个包包了。3 @6 S( j  [6 x+ b8 R' ~
8.        肖磊实验室免费提供human ESC，是自己建的。但金颖实验室不愿意提供他们建的ESC，据说要价很高，以免有些人不会养，反复要细胞，造成浪费。
/ @( i1 H- x1 _  J: z9.        周琪反复强调干细胞治疗的安全性问题，认为是最重要的因素。需解决ES的不均一性问题，需发现更多干细胞Marker。
- o, O9 i/ D0 O9 n4 q10.        栾佐使用神经干细胞（应该是ESC诱导产生）治疗智障、脑瘫，证明对某些病人的确有效，但干细胞治疗的个体差异较大，与药物治疗不同。干细胞治疗不要过多关注全或无的问题，应注意有或无的问题，是否能改善临床症状，不要过多强调治愈某种疾病。需掌握干细胞治疗的指征。
" Z5 Y; B" s: X- X* }$ `1 v2 K11.        在国外参加会议，如每年的ISSCR会议，演讲者必须讲新的、未发表的东西。有些演讲者报告1年后文章才发表。Yamanaka的iPS就是报告数月后才发表。但国外会议是严格禁止拍照、摄像的。我国的会场公开拍照、摄像者太多，既影响别人听讲座，也有剽窃之嫌，建议大家注意。0 C  |6 j: ?8 K+ J$ T

xiaogao

回复 scienese 的帖子; ]- [1 w9 ^2 v" @# T
. u' O  z! ]% B; h* ?/ t# l
     本来对康九红老师的表观研究挺有兴趣的，但是他好像只是讲了一下ChIP-seq技术我们知道的东西和实验的细节，没有对我起到启发作用

xiaogao

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" ?! o' V, C$ B8 Z! G' Y4 X- k- _
    4月份在杭州的那个干细胞会议，肖磊老师也讲了他实验室建的系，但是没有说可以提供，好吧，有机会问题要一些来

scienese

20110604; s6 {( h3 C; I9 i' u' E' j# C
金颖老师讲课总结1 T, b) @" [: ~9 O0 l
Stem cell 定义：self-renew 、differenation3 R) I. d8 k- q- O1 {
八细胞之前叫全能干细胞（totipotent），之囊胚叫亚全能干细胞（pluripotent），再往下叫多能干细胞（multipotent）如造血干细胞和单能干细胞（unipotent）如皮肤干细胞。( x; t! F( s1 S7 e. s4 A* s/ `
8 S# c0 Z' S; r' P, r
在胚胎着床以前叫胚胎干细胞（embryonic stem cell）在着床以后叫epiblast。* o8 ^) B. }; S/ m3 n- V3 X
# q9 P/ m; [5 v2 x* r# w
分离胚胎干细胞有两种方法：免疫外科法，机械法  机械法难度高耗时耗力但金颖老师实验室使用此方法，免疫外科法 要掌握好补体配体的浓度以及作用时间
0 X  C9 A. L4 i
$ ]1 }$ `# y# E  V. Z4 F4 {( w分离胚胎干细胞最重要的一条是要找到优质的胚胎，周围滋养层细胞呈半月形时最好，将内细胞团剥离后放置于滋养层上7-9天后看有没有clone长起来，如果没有可以延长观察时间至两周，把内细胞团放置于饲养层上前两至三天不能看（place ICM on to feeder layer）防止内细胞团漂浮或与feeder 贴不紧。2 B3 f0 A; B. J. o0 h; Z7 Q

8 P, {* J) ?" H( S7 `维持胚胎干细胞多能性的三大关键因素：a饲养层细胞，饲养层细胞密度很重要 有的胚胎干细胞系喜欢密的有的则喜欢较稀的    b  bFGF 最佳浓度为4-8mg/ml   c传代 胶原酶 胰酶 机械法 金老师提倡用机械法 因为胰酶处理后对细胞伤害特别大 很容易就分化 胶原酶也不提倡 金老师实验室的学生传一个6cm 需要两个30min 特别辛苦
4 D/ O$ f# C+ K
. P/ I/ e; L- s细胞分化研究包括三个方面:1,形成拟胚体（EB）拟胚体内就有三胚层细胞  2，co-culture with other      3，monolayer culture with defined medium$ g4 e. f+ S/ N
  \( r( J6 L2 t' e3 {3 _) h! g; x
鉴定胚胎干细胞工作
) K3 ~9 M: Z7 s: [) o核型正常 3 D( D2 T/ O* j: ~" `- {  ~* [- X
能传超过70代次
8 u; z! `1 l+ q; z. p7 g1 K* H能冻存和解冻  人胚胎干细胞不能消化成单个细胞保存 单个细胞特别容易死 每解冻一次都像从新分离一次
4 {4 P7 B) S- u自我更新
4 c. ]" g6 H/ G4 U& P4 M, L, g2 l! w表面标记检测，包括 Real-time、免疫荧光、基因表达谱分析6 X. Z9 I# s1 x; _. s8 ~
端粒酶活性
; P' }' d& Q) F4 E6 t; x% z: u畸胎瘤% M  k3 J. R& y% l2 z% P; H
嵌合体动物$ H' c- a! T. A

% E! l* h9 }) {7 v/ ^9 [康九红老师主要讲了Chip技术 利用转录因子chip-seq和核小体分辨率chip-seq 一般能将发挥某一功能的转录因子缩小至3-5个转录因子
+ r  r4 F1 Z  G( c9 b
% v% J9 e- B3 R6 Q还讲到甲基转移酶 不同的甲基转移酶参与不同的甲基化反应  有的甲基化有利于胚胎干细胞分化，有些甲基化则能使成体细胞重编程
! D% w1 L2 ~9 N: a  \) E4 F
1 N* q6 d* H, v/ R: P: L# E2 Q下午2 d- O$ |8 G- R6 K, |1 Q

( y1 W7 g: Z* a. y) @周琪老师讲干细胞的多能性和安全性$ h5 ~* a4 u* Q; B6 ]. Z- P
周琪研究组还在尝试做猪的胚胎干细胞
$ d! Z7 X! S* \5 w  N2 E$ s0 x8 C1 \2 J( H9 w0 v/ q
        Oct-4        SSEA-1        SSEA-3        SSEA-4        TRA-1-40        TRA-1-81
8 ]% X; {& i: X3 a0 s1 H2 u Mouse) r, t3 @6 J% h' b
ESCs         +        +        —        —        —        —+ b& _+ F! x( j- b7 k6 G" R$ j) M
Rabbit
  [+ Z: W; [. V& b8 [  ESCs        +        +        +        +        +        +! r9 P) V& b  D" [2 j& y  ?
Monkey
0 z8 }/ J$ y/ R- \   ESCs        +        —        +        +        +        +9 t9 c5 ?  X+ Z# g( g1 _
Human
$ i/ K- V( W  b7 K! g  ESCs        +        —        +        +        +        +
# C& w. l. L% a- o* W: P1 {" n6 K8 Z7 g2 m
! {2 v% e+ `5 a' G) G* Q
赵春华老师
  L; L9 l% r) [* b
; }$ y% l1 Q  oDKK 抑制wnt 通路beta-actin  是通过激活nanog 来对beta-actin发挥作用 已发表 可查4 V1 h/ [3 W6 l9 Z

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6 T7 p* E+ ?- G$ L1 e9 \, s4 }6 \2 Y7 V+ n5 A. p
Tpwang的分析很精辟和专业，的确有些会议组织者是为了完成任务（申请课题时有组织会议的要求）、拉关系、盈利等为目的而办会，而不是为了提供交流、合作的平台。
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对于嘉宾老调重弹的问题，我觉得不是很有必要。有些嘉宾开会前几小时才到，演讲完立即飞走。反复介绍本实验室的看家工作是可以的，但不要以此为主。我觉得某些嘉宾为演讲所做的准备时间是非常有限的，若不精细准备、让观众有所收获，恐对不起参会者所花的时间和经费。比如参会的某嘉宾每年自己实验室的运转经费500多万，手下40多人，研究方向也一定很多，随便拿一两个出来讲就可以了。国外的嘉宾也是经常演讲，但每次题目、内容都不同，很少能见到一个题目反复讲的。
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在目前情况下，会议组织者完全可以做的更好一些，而且非常容易。比如：让嘉宾吃饭时与参会者坐在一起吃饭，以利相互交流，而不是让嘉宾们单独在一个房间内吃饭。会后允许嘉宾与参会者有一定的相互交流的时间，不要嘉宾象故意躲避参会者一样，演讲完就找不到人了。晚饭会务组也应提供，以利参会者相互有更多的交流、互动的时间。国外就有一些学术会议，没有大会报告，把大家组织在远离城市的某度假村，让大家在每天的日常活动中相互交流和启发。
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回复 gact 的帖子; k- q; O# z' s0 j& |5 P% h- c# `
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估计载体之类不会给，除非你们有合作关系。我认为他的human ESC需要验证和国际认可，因此愿意免费提供。上述帖子有他的邮箱地址，是他在会上给大家的，你可与他联系。

gact

向肖磊索要病毒载体、包装质粒之类的，会给么？

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会议发言者钱其军、卫立辛、金颖、唐九红、沈晓华、赵旭东同意将演讲幻灯由会议组织者发给参会者，其他演讲嘉宾不同意将幻灯发给参会者。MedSci的代表陈鹂也将幻灯发给组织者，该公司能帮助修改SCI论文和基金申请书，以后可花钱请他们代写论文和申请自然科学基金（国外也有这样的专业代笔公司，写出的论文的确专业！），是否以后实验也可请他们代做，毕业论文也请他们代写？
1 N9 o5 w* J* B$ b5 \" G现将卫立辛的演讲幻灯发给大家，但仅限干细胞之家使用，请不要转发。我看了他的幻灯片，做的很精美，没什么保密的，也有新意，对未参会的同学可能有所启发，因此上传。我相信卫立辛教授会同意我的做法。

hualin840518

不错
$ a1 h# ?* n- P2 K' W顶一个！

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回复xiaogao帖子： 肖磊自己在会上演讲时说免费提供人ESC，并建议多用国内自己建的细胞。现在国内文章大多用国外建的ESC。他说目前世界上建了约1000株人ESC，中国约300株。他給了邮箱：leixiao@zju.edu.cn.
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