参加2011年6月3日同济大学干细胞技术临床转化应用讲座的一点体会：

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1.        本次参会人数约200人左右，共14位专家进行演讲。人胚胎干细胞两人：金颖、孙毅；组织工程学一人：曹誼林；细胞表观遗传2人：唐九红、沈晓骅；iPS三人：周琪、裴端卿、肖磊；MSC一人：赵春华；干细胞定向分化两人人：邓宏魁、赵旭东；肿瘤干细胞两人：卫立辛、钱其军；干细胞临床治疗一人：栾佐。. P4 ^% O. L% I; T
2.        本次讲座新东西有限，多是已发表的文章，且部分演讲者已反复演讲相同题目多次。有些演讲者是在给本科生上课，从最基本的讲起，对于一些从事干细胞多年的人士可能会感到不适应：花时间和经费是来听新东西、开阔思路的。
' B/ @& A1 @" }! B3 u% D7 c- M3.        至少三位演讲者提到的概念：totipotent stem cell:全能干细胞（8细胞前），pluripotent stem cell：多能干细胞(ESC)，multipotent stem cell：多能干细胞，unipotent stem cell or progenitor cell：专能或少能干细胞。. J1 s! y1 O% v
4.        裴端卿报道从小便中提取细胞来制备iPS细胞，原因是有些人不愿意抽血。有必要从小便中提细胞吗？他再次提到维生素C的文章，对他的思维方式和思路感到敬佩。
, _" o8 R2 N4 C2 B' V5.        赵春华提到MSC具有抑制肿瘤细胞的能力，但卫立辛报道MSC是肿瘤微环境主要部分，促进肿瘤发生、发展。不知矛盾的原因在哪里？
; R/ E7 V* t+ N# z- c1 ]+ k* C6.        赵春华认为不同的疾病原理不同，不能完全用MSC治疗，如MSC治疗能加重自身免疫性关节炎。干细胞治疗要主要移植时间窗的选择，需注意在什么时间用干细胞治疗最合适的问题。6 E$ _2 ~1 A: U" J+ y
7.        卫立辛推荐肿瘤领域的一篇综述，发表在今年3月Cell上。从干细胞之家下载需48个包包（共6部分，每部分8个包）。我全部下载该期杂志后提取该篇综述，供大家参考，应至少省下40多个包包了。6 p9 x0 g+ _  z7 N) o5 c
8.        肖磊实验室免费提供human ESC，是自己建的。但金颖实验室不愿意提供他们建的ESC，据说要价很高，以免有些人不会养，反复要细胞，造成浪费。
  c9 L" k5 v4 h+ Y1 q, }9.        周琪反复强调干细胞治疗的安全性问题，认为是最重要的因素。需解决ES的不均一性问题，需发现更多干细胞Marker。
: k" P! j4 p$ F  ~8 [: }- E10.        栾佐使用神经干细胞（应该是ESC诱导产生）治疗智障、脑瘫，证明对某些病人的确有效，但干细胞治疗的个体差异较大，与药物治疗不同。干细胞治疗不要过多关注全或无的问题，应注意有或无的问题，是否能改善临床症状，不要过多强调治愈某种疾病。需掌握干细胞治疗的指征。8 D5 U" D9 n% f8 ]6 `* U
11.        在国外参加会议，如每年的ISSCR会议，演讲者必须讲新的、未发表的东西。有些演讲者报告1年后文章才发表。Yamanaka的iPS就是报告数月后才发表。但国外会议是严格禁止拍照、摄像的。我国的会场公开拍照、摄像者太多，既影响别人听讲座，也有剽窃之嫌，建议大家注意。
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xiaogao

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1 Y, T; d# E0 t" z( }     本来对康九红老师的表观研究挺有兴趣的，但是他好像只是讲了一下ChIP-seq技术我们知道的东西和实验的细节，没有对我起到启发作用

xiaogao

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    4月份在杭州的那个干细胞会议，肖磊老师也讲了他实验室建的系，但是没有说可以提供，好吧，有机会问题要一些来

scienese

20110604
' z# y- b/ l4 d& u! j6 x' e1 `; r金颖老师讲课总结
; ~1 s# d% x7 P. [" X) p* iStem cell 定义：self-renew 、differenation
) L# F! n$ T  }0 _' q八细胞之前叫全能干细胞（totipotent），之囊胚叫亚全能干细胞（pluripotent），再往下叫多能干细胞（multipotent）如造血干细胞和单能干细胞（unipotent）如皮肤干细胞。, U7 v9 F' q  t/ a9 C3 H& j
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在胚胎着床以前叫胚胎干细胞（embryonic stem cell）在着床以后叫epiblast。
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分离胚胎干细胞有两种方法：免疫外科法，机械法  机械法难度高耗时耗力但金颖老师实验室使用此方法，免疫外科法 要掌握好补体配体的浓度以及作用时间
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( d  v) ]4 ?0 f分离胚胎干细胞最重要的一条是要找到优质的胚胎，周围滋养层细胞呈半月形时最好，将内细胞团剥离后放置于滋养层上7-9天后看有没有clone长起来，如果没有可以延长观察时间至两周，把内细胞团放置于饲养层上前两至三天不能看（place ICM on to feeder layer）防止内细胞团漂浮或与feeder 贴不紧。
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% H  ~. w5 ^9 h: k维持胚胎干细胞多能性的三大关键因素：a饲养层细胞，饲养层细胞密度很重要 有的胚胎干细胞系喜欢密的有的则喜欢较稀的    b  bFGF 最佳浓度为4-8mg/ml   c传代 胶原酶 胰酶 机械法 金老师提倡用机械法 因为胰酶处理后对细胞伤害特别大 很容易就分化 胶原酶也不提倡 金老师实验室的学生传一个6cm 需要两个30min 特别辛苦' B* \) W- f1 y0 u2 h
0 k" m3 w% o5 n' p' ?' d
细胞分化研究包括三个方面:1,形成拟胚体（EB）拟胚体内就有三胚层细胞  2，co-culture with other      3，monolayer culture with defined medium+ i8 M8 d* F' t
7 q2 V( I! T- s
鉴定胚胎干细胞工作
3 _* b6 \) U. [9 Z0 Y6 k核型正常
$ ]; z, P. B( X. S能传超过70代次
) ^4 B2 H. y2 j" P能冻存和解冻  人胚胎干细胞不能消化成单个细胞保存 单个细胞特别容易死 每解冻一次都像从新分离一次
3 ~: q( x8 L6 X3 q5 Y" r, B自我更新7 f* Q1 M/ j' @1 J0 ]" @
表面标记检测，包括 Real-time、免疫荧光、基因表达谱分析: E7 ]* @! A9 Y: g+ Z# t
端粒酶活性$ j0 u8 a- ~- S1 R
畸胎瘤9 f$ B+ g6 k" |( h5 m, [& m" s
嵌合体动物8 B5 a( d5 Z) L9 @
* E9 e2 R" L9 z) v( P9 M$ d
康九红老师主要讲了Chip技术 利用转录因子chip-seq和核小体分辨率chip-seq 一般能将发挥某一功能的转录因子缩小至3-5个转录因子* F! F( L: b" B$ A4 [

  \6 L0 `$ I9 I9 I' ]9 H% Q还讲到甲基转移酶 不同的甲基转移酶参与不同的甲基化反应  有的甲基化有利于胚胎干细胞分化，有些甲基化则能使成体细胞重编程
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下午
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周琪老师讲干细胞的多能性和安全性
4 U  L5 L3 ^- p& j$ |6 A周琪研究组还在尝试做猪的胚胎干细胞
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6 \" P" {% y, E9 U        Oct-4        SSEA-1        SSEA-3        SSEA-4        TRA-1-40        TRA-1-81
* b# G. s- H. D( X3 ` Mouse
5 {; G& e& f; _! S+ q) rESCs         +        +        —        —        —        —+ x1 M3 _% p( f- D. }0 \0 ]- X3 J
Rabbit0 j6 S) p, p  g8 k! v
  ESCs        +        +        +        +        +        +; Z5 T7 F$ g' E+ R% T3 H
Monkey& o- y+ V# T* t
   ESCs        +        —        +        +        +        +
1 C+ P7 D1 g; G0 P! ~6 ~Human$ Q! ~" Y8 J4 {, J7 C7 s
  ESCs        +        —        +        +        +        +1 b4 G5 j6 I1 g. k: W
, d3 T9 G7 {1 R  {- [. A! A

2 q% @, t/ B7 V赵春华老师
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  y# i) }+ C7 DDKK 抑制wnt 通路beta-actin  是通过激活nanog 来对beta-actin发挥作用 已发表 可查
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回复 tpwang 的帖子4 l1 {: U& }" g
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Tpwang的分析很精辟和专业，的确有些会议组织者是为了完成任务（申请课题时有组织会议的要求）、拉关系、盈利等为目的而办会，而不是为了提供交流、合作的平台。
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对于嘉宾老调重弹的问题，我觉得不是很有必要。有些嘉宾开会前几小时才到，演讲完立即飞走。反复介绍本实验室的看家工作是可以的，但不要以此为主。我觉得某些嘉宾为演讲所做的准备时间是非常有限的，若不精细准备、让观众有所收获，恐对不起参会者所花的时间和经费。比如参会的某嘉宾每年自己实验室的运转经费500多万，手下40多人，研究方向也一定很多，随便拿一两个出来讲就可以了。国外的嘉宾也是经常演讲，但每次题目、内容都不同，很少能见到一个题目反复讲的。
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% w3 E- y5 k  V) u在目前情况下，会议组织者完全可以做的更好一些，而且非常容易。比如：让嘉宾吃饭时与参会者坐在一起吃饭，以利相互交流，而不是让嘉宾们单独在一个房间内吃饭。会后允许嘉宾与参会者有一定的相互交流的时间，不要嘉宾象故意躲避参会者一样，演讲完就找不到人了。晚饭会务组也应提供，以利参会者相互有更多的交流、互动的时间。国外就有一些学术会议，没有大会报告，把大家组织在远离城市的某度假村，让大家在每天的日常活动中相互交流和启发。( r  \& n* o; ^2 G  i3 Y' B

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回复 gact 的帖子
6 e8 M0 D/ D$ P+ ^) d1 v  Y- q  s( N% ~$ |1 A6 Y9 {
估计载体之类不会给，除非你们有合作关系。我认为他的human ESC需要验证和国际认可，因此愿意免费提供。上述帖子有他的邮箱地址，是他在会上给大家的，你可与他联系。

gact

向肖磊索要病毒载体、包装质粒之类的，会给么？

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会议发言者钱其军、卫立辛、金颖、唐九红、沈晓华、赵旭东同意将演讲幻灯由会议组织者发给参会者，其他演讲嘉宾不同意将幻灯发给参会者。MedSci的代表陈鹂也将幻灯发给组织者，该公司能帮助修改SCI论文和基金申请书，以后可花钱请他们代写论文和申请自然科学基金（国外也有这样的专业代笔公司，写出的论文的确专业！），是否以后实验也可请他们代做，毕业论文也请他们代写？
4 Y- `; @) ^( d$ a/ Y5 D现将卫立辛的演讲幻灯发给大家，但仅限干细胞之家使用，请不要转发。我看了他的幻灯片，做的很精美，没什么保密的，也有新意，对未参会的同学可能有所启发，因此上传。我相信卫立辛教授会同意我的做法。

hualin840518

不错
3 b$ n- f  U  Q顶一个！

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回复xiaogao帖子： 肖磊自己在会上演讲时说免费提供人ESC，并建议多用国内自己建的细胞。现在国内文章大多用国外建的ESC。他说目前世界上建了约1000株人ESC，中国约300株。他給了邮箱：leixiao@zju.edu.cn.
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