帮看看MEF的密度和质量 可以种iPS了吗

573639471

前4已灭活，后2没有灭活，大家看看哪个密度和质量最好？另外，有没有简便快速的方法确定MEF用MMC灭活的效果？多谢- @# l% f0 {) n5 H* M$ w

3 o! N. d& Y5 k' ]! ^" p补充内容 (2011-6-11 10:18):9 _1 z) U6 O3 K) U
我ipS还没准备好（可能还要3天），这4个灭活-消化又铺板的MEF，能放几天？ 放在培养箱里，3天后用可以吗？ 另外这次用不了的最好是冻存起来对吧？

osterix

应该做一个丝裂霉素的浓度梯度实验，用MTT等测定细胞增殖的方法监测细胞增殖情况，确定合适的浓度。在大量制备后，冻存。可以取一部分细胞用于增殖检测，同时检测复苏细胞存活率。确实没有增殖了，也确定了细胞复苏比例，即可开始培养iPS了。

yunxinxu

个人觉得密度有点大

sdjjfangfang

我们用的也是10ng/ml，待细胞生长至合适的密度时，就进行处理，之后用PBS洗三次之后，直接进行冻存。

573639471

回复 sdjjfangfang 的帖子
" t! `$ Q. B+ E- g( d* x# O. M! j! l5 B& ~7 f  ?
我是第一次做 正在摸浓度 文献上都是10μg/ml,我做了8 、10、12 三个梯度，然后MTT测增殖

sdjjfangfang

本人觉得MEF的密度稍有些大，但是MEF的状态还可以。如果已经处理完成，最好直接使用，不要在培养箱中放置较长的时间。
/ G$ n4 J9 K5 s3 @( N你的MEF是丝裂霉素处理的吗？每次都是先处理之后再使用吗？没有批量的处理和冻存？丝裂霉素处理后的MEF若长时间不用可以考虑冻存，之后对于细胞的状态影响不是很大。如果你要长时间的放在培养箱中话，可以考虑用高糖的培养基培养，最好每天都换液。
. ~, m" I" J( i% o; g) c- r) G如果是用丝裂霉素处理MEF的话，应该提前进行实验，摸一个合适的处理浓度。我觉得同样的MEF照射后的状态要好于丝裂霉素处理的。

573639471

回复 w1986725 的帖子; j# h- Q& J2 W! X
( `' a' v2 k6 A7 `2 D
在种干细胞之前，我还有一个问题，怎么确定MEF的灭活效果？如果MEF灭活效果不好，对干细胞有何影响？

573639471

回复 w1986725 的帖子
. ^1 i5 @0 d0 Y( L4 ?6 G! P" s: n; ^) a4 q
那我放在培养箱中4天后种是没问题的，这期间需要换液或其他保护吗？ 非常感谢您

w1986725

对的

573639471

回复 w1986725 的帖子6 ^9 l2 l! A/ j4 L' E
! n# M! {7 }5 B( J/ \  e4 @$ |
不太明白，您意思是说我现在处理后铺好了，如果1周内不用就废弃了，而且再冻存也不好了 对吧