帮看看MEF的密度和质量 可以种iPS了吗

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前4已灭活，后2没有灭活，大家看看哪个密度和质量最好？另外，有没有简便快速的方法确定MEF用MMC灭活的效果？多谢
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2 X" J* h, _8 C. c补充内容 (2011-6-11 10:18):, g1 a8 l% p6 D  M& Z% }
我ipS还没准备好（可能还要3天），这4个灭活-消化又铺板的MEF，能放几天？ 放在培养箱里，3天后用可以吗？ 另外这次用不了的最好是冻存起来对吧？

w1986725

feeder 处理后要冻存， 不可反复冻和复苏，feeder 最多只能用一周

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4 r  W& t* b" U& G" [2 H1 [3 ^* p+ [& U! h
不太明白，您意思是说我现在处理后铺好了，如果1周内不用就废弃了，而且再冻存也不好了 对吧

w1986725

对的

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那我放在培养箱中4天后种是没问题的，这期间需要换液或其他保护吗？ 非常感谢您

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回复 w1986725 的帖子  A  y) O% A7 d2 u
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在种干细胞之前，我还有一个问题，怎么确定MEF的灭活效果？如果MEF灭活效果不好，对干细胞有何影响？

sdjjfangfang

本人觉得MEF的密度稍有些大，但是MEF的状态还可以。如果已经处理完成，最好直接使用，不要在培养箱中放置较长的时间。
" @% v4 F9 z4 R" \2 {你的MEF是丝裂霉素处理的吗？每次都是先处理之后再使用吗？没有批量的处理和冻存？丝裂霉素处理后的MEF若长时间不用可以考虑冻存，之后对于细胞的状态影响不是很大。如果你要长时间的放在培养箱中话，可以考虑用高糖的培养基培养，最好每天都换液。
$ u! a$ o+ c8 m- {! y如果是用丝裂霉素处理MEF的话，应该提前进行实验，摸一个合适的处理浓度。我觉得同样的MEF照射后的状态要好于丝裂霉素处理的。

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; C; _: @6 [2 o) {我是第一次做 正在摸浓度 文献上都是10μg/ml,我做了8 、10、12 三个梯度，然后MTT测增殖

sdjjfangfang

我们用的也是10ng/ml，待细胞生长至合适的密度时，就进行处理，之后用PBS洗三次之后，直接进行冻存。

yunxinxu

个人觉得密度有点大