MEF状态的影响因素有哪些？

christophe

最近连续做了几批MEF，操作程序差不多，但得到的MEF状态却大不相同，有的传到P3都没问题，细胞饱满增殖旺盛；有的刚分离的p0状态都很差，细胞老化严重。请有经验的给分析一下影响MEF的状态的因素有哪些呢？怎么样才能得到状态好的MEF呢？最好从小鼠的饲养开始说起，谢了先！

scottist

原代培养小鼠的状态当然很重要，自己养的话比较麻烦，状态也不如公司的好，所以我都是从公司买孕鼠。上海这边斯莱克只能提供至少14天的孕鼠，南京模式动物所可以提供任意时间的孕鼠，只是运费稍有点贵，南京到上海是200.

yuyan

我们用的上海斯莱克的C57BL6 13.5D的孕鼠，取出来的MEF状态挺好的。P3前细胞，长的都很快。冻存复苏后也没问题。

bb6120

我们的都是自己饲养的老鼠，一般孕鼠要选择一些年轻有活力的！老鼠的饲养都是大同小异的。一般不要打乱老鼠的正常生活规律就OK了。

sdjjfangfang

我觉得首先是和小鼠本身有关系，我们分的MEF，虽然都是同一天的，但是小胚胎的数量、大小都不一样的。还有就是酶消化的时间，千万别消化过了。培养基最好是新鲜配置的。还有就是要注意掌握传代的时间。

christophe

回复 sdjjfangfang 的帖子
: T5 n3 J, i  V4 a; ], M1 }$ m7 K& A9 h7 p# r5 u
我是0.25的trypsin/EDTA消化15分钟，中间摇晃混匀一下，这样不过吧？我看到一些文献中是0.1的trypsin消化30min。

sdjjfangfang

回复 christophe 的帖子: l5 U9 f6 ^8 v+ o5 t- x

( J# u4 X5 I  a) M6 J/ {* c" B这样消化应该是没有问题的，那就考虑一下其他方面的问题吧