急求软骨细胞诱导液的配置

wang6806566

各位同仁，我是要做间充质干细胞诱导为软骨细胞，依据文献：TGF-β1 10ng/ml，地塞米松 1*10-7mol//l，胰岛素6.25ug/ml，转铁蛋白6.25ug/ml，维生素C 50ug/ml。可买来的试剂都是粉剂，TGF-β1 1ug，地塞米松磷酸钠2mg/1ml，胰岛素25mg，维生素C 25g 。不知道如何配置上述溶液。溶剂用什么？储存浓度多少？/ D- S: V3 F* Z8 H! @
急求啊！！

细胞海洋

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myx142

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$ d3 _) I' _1 b( l, T
- u' V+ M/ u4 h( J' e" d# g: ?你好，我也要做软骨细胞诱导分化，请问你是用的什么培养方法呢？在细胞瓶二维培养吗？谢谢！

qiqishichaoren

我们是用PBS去配的，比如胰岛素25mg，量已经很少了，而且为避免污染，不能再经过称量，要直接全部溶解掉。由于最终浓度为6.25ug/ml。则要用0.4ml 、 4ml或40ml去稀释，配制的浓度就相应的分别是6.25X104 ug/ml、6.25X103 ug/ml或6.25X102ug/ml，然后根据你自己的培养液浓度相应加进去。建议用40ml去稀释,之后配100ml 培养液就直接取1ml就可以了。很方便的。

grape

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) L+ W" w- Y4 S) R6 d/ J# F
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9 c! g8 x& O# v4 e! N: ~1 D* x, S7 Z( x4 j  r. l
TGF-β1 溶液的配制方法及说明：
6 e1 F) u! h" s. E+ \（以下配制方法来自TGF-β1厂家答疑，本人解释总结了一下，仅供参考）：, d+ P. O4 _6 B, B. ^+ F8 \* S
1、先配制10mM（即10mmol/L）的柠檬酸溶液：9 k& j) l" n* ^. A% u" E" K
柠檬酸为常用的粉末状化学品，可根据您所有的柠檬酸分子量进行计算(注意看您的是无水的，还是结合水的，分子量是不同的，一水柠檬酸分子量：210.14；无水柠檬酸分子量：192.14)，称出一定量的柠檬酸，然后用双蒸水溶解、定量到一定体积，成为终浓度为10mM的柠檬酸溶液。
( a1 K3 @" J( P  X/ c* y- k7 L2 x5 _通常10mM柠檬酸的pH值即为3.0左右，无需调节。不过最好用pH计或pH试纸测一下，如偏差很大，用NaOH进行调节。此外，在用该柠檬酸溶液溶解细胞因子冻干粉前一定要滤过除菌，因为溶解后是不能再进行滤过处理的，否则细胞因子大多会粘在滤膜上，损失很大。 8 g% m8 ~1 e% u- a0 s2 z7 A
, m' D6 m) ?4 X6 @0 F
注：M即mol/L（摩尔浓度），M是浓度单位。1M=1mol/L，1mM=1mmol/L。
; F, X6 T) S3 c) }) W8 `: W/ JM与mg/L（质量/体积浓度）的换算方法：6 b: I  F; l* |4 [  C7 H
1M=该溶质的分子量•1mg/L；
4 z: {- Y  `6 e# o1 V2 s3 w5 _1mg/L=1M/该溶质的分子量。
$ n$ c! P' C; Z& f! c
/ z  ~4 K" O3 N( D配制实例：( g4 v6 o& a$ p1 V. F
取一水柠檬酸粉剂1.0507克溶于50ml双蒸水，从中取1ml柠檬酸溶液与9ml双蒸水混合，测定/调节pH，过滤。* B: K  p0 j- d+ ~! ~7 r. s
注释：欲配制10mM浓度的柠檬酸溶液，已知一水柠檬酸分子量为210.14，如配制50ml备用，即：' @8 a6 c8 T  ^; W% \5 y) |! f
?mg/0.05L=10mM / (210.14 • 10)
, t6 S" W! W9 g3 ]5 t7 o？= 0.10507mg4 J) z5 Y) s+ ?/ Z5 S' ?
即取0.10507克一水柠檬酸溶于50ml双蒸水即得10mM浓度的柠檬酸溶液;
* B4 y1 t7 }& i: m! ?为了称量方便，可以先称量一水柠檬酸粉剂1.0507克，溶于50ml双蒸水，& l* p! d* m% s% `3 z& i" t
再从中取1ml柠檬酸溶液与9ml双蒸水混合，所得10mM浓度不变。
! t9 {& e4 R; z) ?! ^( Y/ `% f
. B, @7 U& q+ x) k/ z& V; o5 A2、用10mM（pH值3.0）的柠檬酸将TGF-β1冻干粉重悬至0.1-1.0mg/ml。
8 J- ]5 D0 g1 A注意一定要在此浓度范围内，否则蛋白活性不会完全恢复；8 q  W/ H* U9 _) \
3、然后立即用含0.1%的BSA溶液(此为缓冲液，如PBS等)或含10%FBS(小牛血清)的完全培养液将重悬过的蛋白溶液进一步稀释到一定的浓度（您的工作浓度）。特别注意的是，在用柠檬酸重悬后，一定要立即用BSA或FBS溶液进行稀释，否则因TGF-β1蛋白的吸附性极强，很快会粘附在溶解TGF-β1所用管的管壁上。
0 b, j& `6 `, o- n  {* v% l
7 z+ q$ w& w1 L; d保存条件：如果短期用，则一般置于2-8℃，活性可维持一周左右；
3 G" t# b% V0 j4 x/ R7 K3 F如长期保存，则需分装冻存于-20℃— -80℃，至少有一年以上的效期。9 E2 R0 J$ M7 d9 z0 i

( g3 k9 H" a2 ?& m$ F( \: o1 l6 q再仔细阅读一下相关试剂的说明书。! K2 X+ w9 t+ ^# S
其他试剂用双蒸水配制应该就可以了。