关于间充质干细胞培养的一点经验

漂泊的风

楼主二次消化的目的是不是要回收利用先前的培养瓶啊？这样才说的通，要不就没必要进行二次消化啊，直接丢弃不就行了吗。

azzyou

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" X  ]( ^. C8 j& D
2 l& S+ t) p. M( O$ c1000RPM/min 5min6 Z6 e& [5 v  n: Y
或1200rpm/min 3min

azzyou

对啊，第一次消化不下来的都不要了，很大一部分不是间充质啊。而且有一个小窍门，原代制作的时候，好像是3-4天早贴壁的是间充质，上皮细胞贴壁比间充质晚，所以可以通过一次换液可以纯化细胞。

cx4236850

首先感谢楼主的经验，学习了。离心的参数大概多少，想问下。。。
6 }( A# ]# m4 P

zhang0194

回复 sdwzg119 的帖子! w, W# G3 H7 B; V' H

7 P7 {2 o3 W3 t2 |这个实验我们做过一次，如下：& I' N7 @' B" D% t& T
  1.消化后把胰酶离心除去，然后吹打均匀后再加PBS洗一次，离心除去，传代。
. L: u  U' p/ s4 w7 g  2.消化后把胰酶离心除去，吹打均匀后直接传代。
' l' s7 Y: ~" q2 S这2个程序就相差一步，但是用第一种方法传代的细胞比用第二种方法传代的细胞长势好，并且贴壁牢！

天枰2012

楼主说细胞P7-P8就老化了是在加因子还是不加的情况下啊？另外不是说加因子容易诱导细胞分化吗？你的有没有这种情况啊？

demonleaf

楼主血清用的是什么牌子啊？

hnsdlgl

骨道边 发表于 2011-7-19 23:43 9 F/ n. p+ f5 ?9 ?( f% H7 k$ s
楼主有干细胞培养的protocol吗，急需一份啊，我也一直在养干细胞，可是一直出不来，老鼠都被我宰了N个了，实 ...

/ ^5 ~: M4 ~2 i+ B/ \& V( t% X" N鼠的MSC是不太好办，但就生长而言，小鼠的比大鼠的容易养出来，但是小鼠msc最大的问题就是：要纯化很麻烦，通常要纯化好几代才能弄到纯度较高的MSC。- v0 K4 b' N0 D9 M0 D
/ P7 Z" h& q! }5 J' i7 Q4 ^
现在我都不养小鼠MSC了，改养人脐带的，这种细胞不仅很容易养出来，而且原代就比较纯，且如果操作得好的话，这种细胞通常能传到接近20代，当然做实验最好的窗口还是第5代-第8代。如果没有什么特别原因，只能用鼠的MSC，不妨试试脐带的

dophins

我没有加bfGf，细胞传代后生长缓慢，而且容易分化，是不是和bfGf有关啊

hwlightning

楼主，我觉得少量胰酶对MSC细胞的生长没多大影响
9 r7 a1 Z% `5 `( M0 u4 y* K- l  K: z我用计数法检测细胞生长周期，24孔板用200微升胰酶消化，再加了300微升完全培养基，混匀技术后就没管了，
* u3 R. v0 K3 \5 m* {  Z" U6 l第二天我在看的时候空里面的细胞又重新贴壁了，而且长的挺好，显微镜观察细胞还是挺典型。
9 ?/ s6 z4 d* z4 H* i我用的是脐带间充质干细胞。
  i8 S4 X/ M# A细胞的其他功能还存不存在我没有进步鉴定。