求详细的冷冻切片sample处理protocol

ivantanqi

最近本人要收tissue （tendon and muscle) sample，
1 e4 L' V1 J5 @) D0 A3 Y) ?打算做一些冰冻切片和石蜡切片，后者比较熟悉，
, A& X! H) [/ j' R3 Z' e前者没有做过，有谁有比较详细的protocol, 特别是关于怎么处理sample, 怎样固定啊，怎样冷冻啊，6 Z# c. ]: H0 [
能够最大限度的保护抗原啊
3 f; {7 z8 a2 Y有经验的，帮帮忙哦，多谢啦。

shen_coco

回复 dulaiyouyu 的帖子# b  \1 M6 U  G  G# ]1 ^
0 K8 ]/ ~* B3 y  D9 m7 H2 }
PFA是什么东西，具体灌流是怎么做啊，脱水又是怎么做的呢

dulaiyouyu

回复 runsong 的帖子0 ^3 f) Q) |, P. |6 ?: B7 k
+ q0 i1 l$ \4 Q, M& v7 e
固定是为切片做准备。

dulaiyouyu

回复 shen_coco 的帖子' N; z5 [1 H7 |& p; G
) f) U& J2 ?* f& K; U) w# L
固定的话，我个人认为有2个最主要的作用。其一是将血液替换掉，避免染色时候有干扰。更重要的是将组织的形态固定住，尽量维持在活体时的形态，而不因为体液流失而萎缩。。。。

dulaiyouyu

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4 v0 R# U% z% s6 l1 X) D
一样的，隔壁实验室有人做过睾丸切片。我给的protocol是循环系统的灌流。所以灌流固定好之后，从脑到肝脏到睾丸都可以取出来，蔗糖梯度脱水，然后OCT包埋作冰冻切片。

yuanyan2010

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% L! m; t6 P6 q+ f+ t2 o& @弱弱的问下子，睾丸组织的话也用4%PFA灌流吗，怎么个灌流法嗯？还有就是处理时间怎么掌握，还有就是梯度脱水的时间？谢谢

runsong

是先切片后固定还是先固定后切片？

shen_coco

dulaiyouyu 发表于 2011-7-23 13:50
5 b& A/ `7 V) A1 |回复 shen_coco 的帖子2 W. Q. q& c* X4 @2 K5 H; n
$ v$ w% c2 ?" a1 y/ h
当然要固定。

' M: ?; H) A* G6 ^9 T2 F% r1 m
我听别人说，直接用TISSUE-TEK OCT 在-80度包埋就行，不知道这样做可以么，固定的作用主要是什么啊

dulaiyouyu

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# h- E% v4 N4 k$ L% M  L* \当然要固定。

shen_coco

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* [6 x" c# ]" d3 c. j' T" r- B6 n
需要固定吗？直接包埋行不行啊