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呵呵～我2月8号分的，今天正在准备转到MEF上。我没用磁珠分选，就是消化下来直接铺上的。% v% I# y, F% V) m; _3 b W1 y+ y
用的是DBA/2和 DBA/2×C57 两种，前者用7day后者用的是14day。感觉7天效果明显比14天好，克隆非常漂亮。我同时还用了C57的7天，完全相同条件养的，一个克隆都没长，可见品系极为重要。我用的是所谓“SF medium”，就是那个超级复杂的，基本没有改配方～ 没加LIF,孕酮，雌二醇。
6 l# X' `4 A1 I% O
( x1 T( H3 {1 q- Q4，StemPro34 SFM base Invitrogen, 10639-011 培养基- A- p1 a# k4 K3 f
10639-011% A7 V, B! Z. q7 k! M* ]5 a' c
StemPro®-34 SFM (1X), liquid+ u/ H. V. \; C) C/ h: w5 O
500 ml$ L) i* [$ [3 c
; o6 x4 N+ c% E( ?$ V# }1 c5 `5 n
http://zh.invitrogen.com/site/cn/zh/home/Products-and-Services/Applications/Stem-Cell-Research/Hematopoietic-Stem-Cells/HSC-Stem-Cell-Culture-Media-Reagents/stempro-34-sfm.html
. T, W8 r- u2 b: q7 u% q: {
0 c- K! W" N# Y( ^8 ~
7 i6 I1 Y! B* U- Z: V; N5 w$ H5，40X StemPro34 nutrient supplement Invitrogen, 10639-011 培养基添加物$ k, [9 w, P) Y
这个和上面的4是一起的。
. N# l1 u( K4 u9 m" a/ K1 I1 M9 a& [: y
6 R) l& l2 x0 R) H. F) Q6，Bovine serum albumin Calbiochem, 126609 培养基添加物 final 5mg/ml z. ?( P: \, t/ a, i
$ M- A+ m3 i$ `7 y3 ]) E( ?http://www.merck-chemicals.com/china/life-science-research/albumin-bovine-serum-fraction-v-fatty-acid-free-nuclease-and-protease-free/EMD_BIO-126609/chinese/p_oXeb.s1LbkMAAAEWTmIfVhTm?PortalCatalogID=merck4biosciences& P+ ]# c3 [. U% N% T/ |2 W; I' t3 j
0 q7 l0 k+ ~* u4 q [* T& O
+ b1 H" F* Q- a4 K7，d-(+) Glucose Sigma, G7021 培养基添加物 final: 6mg/ml
- l7 l6 v% X+ C! r1 `6 U+ [/ }+ d" E8 b7 u
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&N5=SEARCH_CONCAT_PNO%7CBRAND_KEY&N4=G7021%7CSIGMA&N25=0&QS=ON&F=SPEC
6 P2 }& ?& F5 l* A+ C( X
8 X3 e- o y& d6 u1 q8，L-Glutamine Invitrogen, 25030-149 培养基添加物 - \# e M, N# H' K, \8 H
- u& J8 g$ G2 @7 A8 @https://products.invitrogen.com/ivgn/product/25030149?ICID=search-product9 O0 B1 Y6 Z9 q; s: U! a5 L/ t) p
- n' a7 |8 V. A2 d" ` W w4 _9，100X MEM vitamins Invitrogen, 11120-052 培养基添加物
: ^( `9 p. ?5 d# R G* N6 w3 T1 U5 J! M
http://products.invitrogen.com/ivgn/product/11120052?CID=AFLBC-Invitrogen-11120052
+ G/ u+ w0 z% m6 C1 d- z( x2 m, a' p+ }8 J: D7 O' Y
10，100X Nonessential amino acids Invitrogen, 11140-050 培养基添加物8 {2 a" J7 J: T4 v+ |" n& ?3 g P
+ ?4 w- Z6 d# ?/ W* q
http://products.invitrogen.com/ivgn/product/11140050?ICID=search-11140050$ d' p* \4 q0 v/ g: k6 E$ [
11，d-Biotin Sigma, B4639 培养基添加物 final: 10ug/ml0 W6 F6 D' m& G6 @
7 S: O4 H# ]- v g% d; @) ]( t: [http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&N5=SEARCH_CONCAT_PNO%7CBRAND_KEY&N4=B4639%7CSIGMA&N25=0&QS=ON&F=SPEC+ L/ e: b" X. m. O) V; R
, l6 S3 [) Z5 X# B/ r/ y/ i12，Insulin Sigma, I1882 培养基添加物 final: 25ug/ml
9 n! |1 x1 o2 B5 C* ~7 P; \' U! `& Z- K/ s6 [
http://www.krackeler.com/products/sigma/SIGMA/I1882
, {0 k. ^) }* X9 U3 |3 V/ |4 ]9 z3 T( u8 Y2 s6 l2 N. C
13，Pyruvic acid, sodium salt Sigma, P4562 培养基添加物 final: 30ug/ml
, ]$ \1 R- N" v; _, \0 m$ M5 q4 O l9 g, L" _" z& X7 W* ?
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=zh&N4=P4562|SIGMA&N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&F=SPEC4 v# A' y8 J+ ]* ^8 }
14，dL-Lactic acid (60% solution) Sigma, L7900 培养基添加物 final: 0.06%
+ x$ h' p9 U9 n; w: l; |' B! B& o& V+ W! P1 p5 V
15，Ascorbic acid Sigma, A4034 培养基添加物
' }" e% f( s! h$ x2 {& I. [3 d' W
" ]; |& k: ?9 m0 x16，Sodium selenite Sigma, S5261 培养基添加物 final:30nM
% |! c$ t0 v7 T8 b: W' t. ^+ d# {; z) @' I
17，Putrescine Sigma, P5780 培养基添加物 final: 60uM6 f1 f- @" T: O9 s* D* w0 u; w" q
# V b: C( j1 d8 T0 x7 |! v2 F4 J18，Bovine Apo-transferrin Sigma, T1428 培养基添加物 final: 100ug/ml+ A, G9 ?6 }' r( R: d3 F* ~
19，Progesterone Sigma, P8783 培养基添加物 60 ng/mL
. d# E% q. J5 g% K3 |0 j孕酮。
. O! T2 i( @8 S x20，β-Estradiol 17-cypionate Sigma, E8004 培养基添加物 30 ng/mL
' \6 S5 {8 E* L1 e雌二醇。% U/ w- r6 e, h, f/ P. y6 V8 M; F
21，ESGRO (mouse LIF) Chemicon, ESG1107 细胞因子 。
- _) Q/ p" _ k, |: |( L$ B( G$ \ E; [, Z
22，Recombinant mouse EGF R&D Systems, 2028-EG-200 细胞因子 final:20 ng/mL2 u: L) z& O; D& j2 n" W
# _4 W. @: @/ H3 Y
http://www.rndsystems.com/product_results.aspx?r=0&c=78&s=0&a=0&m=0&k=2028-EG-200&b=False&cj=-1&o=AND&p=0
9 z$ ^* a* i2 @8 e# N8 w
0 L( F2 ~9 `, b* U2 x0 N ]3 \7 k0 D3 Q x23，Recombinant human basic FGF Sigma, F0291 细胞因子 final: 10 ng/mL4 R1 X2 B4 P) ~; U% s
& t& _' |8 j. _6 hhttp://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=zh&N4=F0291|SIGMA&N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&F=SPEC
( v7 m! z. E+ N- k1 ]( l6 V4 b( i1 j
24，Recombinant rat GDNF R&D Systems, 512-GF-050 细胞因子 final: 10ng/ml
: o5 t- P* x8 T- c
# t1 l# C6 P" ]9 n1 @2 N6 x1 ohttp://www.rndsystems.com/product_results.aspx?c=78&s=0&o=AND&a=0&cj=-1&k=512-GF-050*9 ~: K9 S6 L: \- J# K1 u
9 ^6 h# j# y" m) w! H
25， 2- mercaptoethanol
* V6 V- l5 \. Z5 c* l3 e/ d: y6 g- L |
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发表于 2011-7-24 19:49
发表于 2011-12-8 11:57
