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呵呵～我2月8号分的，今天正在准备转到MEF上。我没用磁珠分选，就是消化下来直接铺上的。
9 g1 _: o8 ], @' C用的是DBA/2和 DBA/2×C57 两种，前者用7day后者用的是14day。感觉7天效果明显比14天好，克隆非常漂亮。我同时还用了C57的7天，完全相同条件养的，一个克隆都没长，可见品系极为重要。我用的是所谓“SF medium”，就是那个超级复杂的，基本没有改配方～ 没加LIF,孕酮，雌二醇。 T* p$ {" k$ |% h* T
$ a% M. b! X7 g; p# J) ~4，StemPro34 SFM base Invitrogen, 10639-011 培养基
' I5 {+ r" m9 @$ ~( y10639-011
0 A: o/ X2 X7 w2 J( E6 E0 ?& KStemPro®-34 SFM (1X), liquid2 b' T4 [% [) `! p: V, v- `4 h
500 ml6 Z$ J! @# U5 d0 v* t; {! i
J8 u, K* F- D# K) o" N3 D6 C8 S
http://zh.invitrogen.com/site/cn/zh/home/Products-and-Services/Applications/Stem-Cell-Research/Hematopoietic-Stem-Cells/HSC-Stem-Cell-Culture-Media-Reagents/stempro-34-sfm.html: g% G8 q: Y' g3 ~ S/ ?2 q8 u
5 c: y9 ]* e. O! X! \; h
& R- k2 P* V! \# N5，40X StemPro34 nutrient supplement Invitrogen, 10639-011 培养基添加物6 l7 E8 i' f1 @6 H
这个和上面的4是一起的。
/ i& z7 } C# v- z
4 L& O( r4 d, b7 Q% N* Z7 ^8 ^7 l; n/ M; v( K0 ~( X/ z
6，Bovine serum albumin Calbiochem, 126609 培养基添加物 final 5mg/ml
# ^8 {/ n- D6 Y( a9 S! E3 k9 Y, u
! H+ A8 Y w" mhttp://www.merck-chemicals.com/china/life-science-research/albumin-bovine-serum-fraction-v-fatty-acid-free-nuclease-and-protease-free/EMD_BIO-126609/chinese/p_oXeb.s1LbkMAAAEWTmIfVhTm?PortalCatalogID=merck4biosciences
3 j1 \, D8 Z& W5 g
, _( J& S( \9 {2 [0 t2 f: O5 V9 R$ L' G/ `
7，d-(+) Glucose Sigma, G7021 培养基添加物 final: 6mg/ml
# V' }& M# W2 ^# I
" ]* H* ~+ F! I& c( q3 m; F9 ]http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&N5=SEARCH_CONCAT_PNO%7CBRAND_KEY&N4=G7021%7CSIGMA&N25=0&QS=ON&F=SPEC
& o. w4 B1 Y5 ^ A) C% ?* j
2 B) \# y5 ^: U. H' L/ U5 \8，L-Glutamine Invitrogen, 25030-149 培养基添加物
- c" K% u2 d3 l' p8 {' x/ V6 D
& j6 @* `# h" |+ F& k5 Yhttps://products.invitrogen.com/ivgn/product/25030149?ICID=search-product+ R; L+ [$ p+ x( r& E
1 T: x6 b% a& J9 p9，100X MEM vitamins Invitrogen, 11120-052 培养基添加物; E+ i3 v, `6 x2 a
1 Y4 w& L$ O$ k" qhttp://products.invitrogen.com/ivgn/product/11120052?CID=AFLBC-Invitrogen-11120052$ z: u' }! U' ?. A( Z1 }( W! h
3 r+ y3 e' t2 ]+ N& V* c
10，100X Nonessential amino acids Invitrogen, 11140-050 培养基添加物
: Y8 Q0 f$ W$ t- }0 e" ?+ l) \
# z$ N% E8 n; _' whttp://products.invitrogen.com/ivgn/product/11140050?ICID=search-11140050( }+ B6 R) J# ]& w* ?/ N% v
11，d-Biotin Sigma, B4639 培养基添加物 final: 10ug/ml; E0 H# ?5 i' g3 y$ B, ~' ~
5 c4 T: } s$ J
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&N5=SEARCH_CONCAT_PNO%7CBRAND_KEY&N4=B4639%7CSIGMA&N25=0&QS=ON&F=SPEC
' P$ q- v8 h8 |4 N! d z* J! X! ?5 N( T$ Q/ X; G$ r" M
12，Insulin Sigma, I1882 培养基添加物 final: 25ug/ml
8 Z$ V4 g0 I- V# s
+ m P* P# [ x, w; p7 uhttp://www.krackeler.com/products/sigma/SIGMA/I1882, w2 Z6 D- w" ~: `- d% T( G+ |& W
* v$ {; {, s2 j' b# J1 G, T13，Pyruvic acid, sodium salt Sigma, P4562 培养基添加物 final: 30ug/ml
1 x+ Q% y4 l9 M% `7 H
4 v7 L; p8 T0 yhttp://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=zh&N4=P4562|SIGMA&N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&F=SPEC
- f3 K3 L4 j. k4 h6 C, a14，dL-Lactic acid (60% solution) Sigma, L7900 培养基添加物 final: 0.06%1 Y+ C& i# h' d: k
6 m7 _0 P8 o) c
15，Ascorbic acid Sigma, A4034 培养基添加物
' R, U2 R0 P4 Z% |( Z) E4 a% S4 \/ {: C
16，Sodium selenite Sigma, S5261 培养基添加物 final:30nM
2 t* w4 B) w$ K4 d
# I" Q4 D) D! F% B+ h# }7 ?; m5 U17，Putrescine Sigma, P5780 培养基添加物 final: 60uM: _3 t5 M0 f r0 _
8 |5 p3 J9 e6 z7 v18，Bovine Apo-transferrin Sigma, T1428 培养基添加物 final: 100ug/ml" g& ?, E7 Q+ |, C- Y9 K
19，Progesterone Sigma, P8783 培养基添加物 60 ng/mL/ L- l$ i% v$ w y2 e
孕酮。
- z3 H' `5 X1 F& d; ?20，β-Estradiol 17-cypionate Sigma, E8004 培养基添加物 30 ng/mL) ?8 Q2 a2 C: h& d; S8 o6 U
雌二醇。2 i0 ]( }0 y1 ~1 v
21，ESGRO (mouse LIF) Chemicon, ESG1107 细胞因子 。
1 f- M+ B" T" M+ }* B9 k9 I0 ]% w8 d/ g! F; Q
22，Recombinant mouse EGF R&D Systems, 2028-EG-200 细胞因子 final:20 ng/mL
) w. e* z4 Z8 z/ t& G( |
4 _- H' V) r# V% n( Ghttp://www.rndsystems.com/product_results.aspx?r=0&c=78&s=0&a=0&m=0&k=2028-EG-200&b=False&cj=-1&o=AND&p=0# x3 E. S1 N0 O1 j7 h
- ]& J, u/ i7 v# u% w23，Recombinant human basic FGF Sigma, F0291 细胞因子 final: 10 ng/mL# I; v0 C) r8 ]+ v! P! h1 a* [" O
# Z7 p* C8 {: A0 l/ V% W# mhttp://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=zh&N4=F0291|SIGMA&N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&F=SPEC
& N# o# {3 Y# F1 i3 e2 Z+ E
! h3 h; p/ o# G+ U5 x24，Recombinant rat GDNF R&D Systems, 512-GF-050 细胞因子 final: 10ng/ml0 Z8 ]0 O' W' L j6 x
' Z. d* G6 _: S8 y( w5 a8 R; [: fhttp://www.rndsystems.com/product_results.aspx?c=78&s=0&o=AND&a=0&cj=-1&k=512-GF-050*. Q: E. W' d1 N S
7 H, {' b) R$ c' ]) p' X( i25， 2- mercaptoethanol ) G ^4 a7 p# V& K t/ @0 c
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发表于 2011-7-24 19:49
发表于 2011-12-8 11:57
