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[请教] 关于细胞消化的相关实验操作   [复制链接]

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楼主
发表于 2011-8-17 16:05 |显示全部帖子 |倒序浏览 |打印
最近做实验,在细胞消化的过程中,发现自己对于其机理和反应的相关条件不是很清楚,上网查资料众说纷纭。主要是对于胰蛋白酶消化干细胞的过程,简单点说,就是用胰蛋白酶加入长满细胞的克氏瓶中(已提前吸取,弃掉培养液),来回摇动,使胰蛋白酶铺平培养面。是不是只要铺平了,细胞就在消化中,不用反复继续摇动?胰蛋白酶的消化能力有那么强吗?才0.25%啊。8 Z# F' q5 M2 `4 g  x
( ~! M  k' ~0 n2 \: B
除此之外,中和消化许多人采用血清或者是HANKS‘液,其后也需来回摇动,使其与培养面均有所接触。对于血清和胰蛋白酶的比例,网上也各有说法,麻烦各位战友能不能说说各个说法的原因。反正我们是用10%。
' @3 [) p1 ~; s
8 Y# I% O% w$ L( g6 o7 M最后,对培养面先用混合液(胰蛋白酶和血清)对培养面进行吹打,后用PBS或者HANKS’液进行多次吹打,我是新手,对于吹打有些顾虑和疑问?忘战友指教。个人认为用混合液时,由于细胞已经被作用消化过了,随便吹几下就行,然后用PBS或者HANKS'液进行仔细吹打,对于吹打的次数和力度,还有时间总是掌握不好,时间长了,怕细胞损失多,力度大了怕细胞机械损失大。用一句话解释啊,哥成了一个矛盾体啊,晕。忘广大战友赐教。
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沙发
发表于 2011-8-17 16:10 |显示全部帖子
还有一个题外问题,那就是有一次,细胞处理的有点多,发现消化时有一些白色团块,师傅说是消化过了,经过吹打以后,可以打散。7 c) f  ?  W' `/ K" t

6 Y4 y+ v( n% m3 S! e& }由此,想多嘴问一句,要是一直用胰蛋白酶消化,让细胞都消化成团块,吹打不就省力了吗,但是人家说消化成团块后,对细胞很不好。但是你想想,回头离心后,吹散,细胞不也是悬浮状态吗,也是分离的,感觉没啥区别。5 W/ g% l. g8 V, v
8 C: A' M5 v2 t2 }7 Y' M
希望大家指正我的各种错误想法!
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