体外受精培养液的pH各是多少！

huozhicb

给位大虾，小弟摸索了好长时间的IVF但是效果一直不好，换了很多培养系统（HTF/KSOM-AA、mKSOM/KSOM、T6/CZB）都不稳定，找了一些原因，发现各方面的资料里，对于IVF过程中使用的各培养液的pH描述得很少（也许是小弟不才，没有查到一手资料），请各位专家指点。麻烦大家把自己使用过的系统和每一过程使用的培养液的pH晒一下吧，谢谢！1 F& m# f$ {+ ]7 M. ~
我配好各种培养液之后，将所有培养液都调pH至7.4左右，使用前12h做成小滴，用矿物油覆盖，放入培养箱平衡。

帕帕拉

你做的什么动物？

帕帕拉

你做的什么动物？

jhu132llh

都是7.4的
) V( s6 q' b4 F/ {  F一直也没问题的
- F+ P3 b4 @: B1 U* B: P1 R: |8 y. _不知道你的怎么就效果不好
6 m) f4 }: K( c( S$ l2 z) h考虑过培养箱的培养条件吗

POPOLD

7.2

huozhicb

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7 ]1 d4 U) g! B+ a, E3 q9 f4 \
  u, q: }3 n3 k, ~- O小鼠的谢谢支持

huozhicb

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+ d1 K. @# q' c6 z3 I- _* O5 r; g
. \, N/ n# X% D( t4 ^/ B# X6 ?谢谢您支持！我们的培养箱是新买的，买的时候校准过：37℃、5%五九高纯二氧化碳、饱和湿度。
. a4 b3 v/ j: v, o我想问一下，你们的pH时按照《小鼠胚胎操作手册》上的方法，先充气平衡然后测pH吗？
/ I+ I* K& Y" G我们这里没有充气的装置，所以直接用pH计调的pH。感觉靠酚红的颜色标定有迷惑性：加了BSA之后培养液的颜色都偏黄。
$ O) F, u% j- J* p. }

jhu132llh

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% \1 D7 d4 A7 n$ F% |
) z3 {$ {/ H! r) U6 e/ Z  y先充气平衡然后测pH是要更加准确# \. X  m! b1 K2 E
但是一般情况下我们也不这样做5 r/ L0 i7 G+ y3 J! h
太麻烦了
  j5 H6 P3 F. i都是直接用pH计调的pH* |4 A' F2 ~) D" ?
是的+ i( Y7 e' t# U" l, M/ B
加了BSA之后培养液的颜色是偏黄的
* |& r2 S+ v( H6 A但是只要PH值对了就OK了，一般在PH校准后在培养箱中CO2对PH的影响不大的
% a: @8 X3 w1 p不影响细胞的正常生长的
, A6 j4 e8 }$ C; M只是颜色是确实有点欺骗性* t$ f0 a, D4 O7 @/ V1 |
需要及时换液

huozhicb

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+ m8 Q; v7 V2 p% Y; f5 w$ A  l9 S, |7 d% b/ ^/ A% p- E
谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！
+ L/ Q$ q/ J# }) w! t$ i
5 _7 h& N& i$ \7 l! Y0 ~之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？! `  ]  I" R2 O

# d1 J5 q: E  c% Y我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？" @- c2 l" `9 B0 H& p- y- T4 e

9 N! k/ w: a5 Y& L$ \- h1 w/ b) a: g麻烦版主大哥了，谢谢！

huozhicb

回复 jhu132llh 的帖子7 X6 m* p. y  T/ ^

8 V* q  }1 H, P3 E  E5 a谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！
4 k& H& m# W) R# d2 F( T
" c0 ~7 R( \$ F" p, q之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？
/ |( x) c( r5 ?' o# j2 Q
8 ?0 w. z' {9 D" a, X2 J1 O我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？
$ U: q, f1 E( L) A4 U5 K% _1 k5 i8 `! j  L
麻烦版主大哥了，谢谢！