体外受精培养液的pH各是多少！

huozhicb

给位大虾，小弟摸索了好长时间的IVF但是效果一直不好，换了很多培养系统（HTF/KSOM-AA、mKSOM/KSOM、T6/CZB）都不稳定，找了一些原因，发现各方面的资料里，对于IVF过程中使用的各培养液的pH描述得很少（也许是小弟不才，没有查到一手资料），请各位专家指点。麻烦大家把自己使用过的系统和每一过程使用的培养液的pH晒一下吧，谢谢！3 P* ~) }, m. e: d( x
我配好各种培养液之后，将所有培养液都调pH至7.4左右，使用前12h做成小滴，用矿物油覆盖，放入培养箱平衡。

帕帕拉

你做的什么动物？

帕帕拉

你做的什么动物？

jhu132llh

都是7.4的
5 J! v8 j" v- g0 \8 o) Y一直也没问题的
: S! j5 P' s/ T# {  ^1 g6 z, \不知道你的怎么就效果不好- b5 u5 l. f" W2 m% ^' N
考虑过培养箱的培养条件吗

POPOLD

7.2

huozhicb

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6 U( p& Y! {: o$ T. t9 t, E' N0 x8 W: I  p% b2 ]
小鼠的谢谢支持

huozhicb

回复 jhu132llh 的帖子" i5 H& Y. S' C
( W( l: ~$ V7 c' |3 y
谢谢您支持！我们的培养箱是新买的，买的时候校准过：37℃、5%五九高纯二氧化碳、饱和湿度。
/ h5 \/ V- U- [+ f  ^) r$ a我想问一下，你们的pH时按照《小鼠胚胎操作手册》上的方法，先充气平衡然后测pH吗？) e; ^) f3 v* e
我们这里没有充气的装置，所以直接用pH计调的pH。感觉靠酚红的颜色标定有迷惑性：加了BSA之后培养液的颜色都偏黄。
  b1 L' c% n/ p9 p% q' |

jhu132llh

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, Q) p0 {5 ^; f6 B9 W! D3 C, W
& p* K% n% T( [先充气平衡然后测pH是要更加准确+ {' h5 O- c! n  o2 k
但是一般情况下我们也不这样做. y  {) j: n/ [. k( S) }9 _
太麻烦了5 i% w* o1 l0 ~, m; S6 W
都是直接用pH计调的pH& ~( u* q5 Q, u% u$ Y3 U: B
是的) B, a" s' @& ^6 [
加了BSA之后培养液的颜色是偏黄的
% e4 q4 h5 z" j, n/ \: [) ~, b但是只要PH值对了就OK了，一般在PH校准后在培养箱中CO2对PH的影响不大的. O4 U- l& I# t9 z3 S
不影响细胞的正常生长的* ^+ p: G* K3 @" ?$ N8 p: [
只是颜色是确实有点欺骗性/ ~. ?+ Q4 i: F' g9 r
需要及时换液

huozhicb

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& I1 t6 c6 r; P; ^! m
% R5 d, [$ M7 H: ]0 f& k谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！
) k8 k& @3 g* K) E9 J
( `9 n9 `$ g1 \; n) n4 d, s, N之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？
+ y; r. s4 z8 z! L, i5 R5 J  u+ k" B& z2 e# z/ J. D2 G
我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？/ Y0 U. v& t% j% d
7 b" r7 U; M: ]5 |) w, ~7 f; L9 v
麻烦版主大哥了，谢谢！

huozhicb

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" \# \8 i& S& b
  ]6 d5 }/ z: d1 w4 B3 T4 T' A, b谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！% D+ S# {  |& n3 ^
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之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？
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+ P- y$ w  O# S, d; m我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？
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麻烦版主大哥了，谢谢！