体外受精培养液的pH各是多少！

huozhicb

给位大虾，小弟摸索了好长时间的IVF但是效果一直不好，换了很多培养系统（HTF/KSOM-AA、mKSOM/KSOM、T6/CZB）都不稳定，找了一些原因，发现各方面的资料里，对于IVF过程中使用的各培养液的pH描述得很少（也许是小弟不才，没有查到一手资料），请各位专家指点。麻烦大家把自己使用过的系统和每一过程使用的培养液的pH晒一下吧，谢谢！& V# D3 _8 k' k& O
我配好各种培养液之后，将所有培养液都调pH至7.4左右，使用前12h做成小滴，用矿物油覆盖，放入培养箱平衡。

帕帕拉

你做的什么动物？

帕帕拉

你做的什么动物？

jhu132llh

都是7.4的) I3 E7 Y. t3 J1 L9 ]1 ]9 k9 N, b# V
一直也没问题的$ h, v" n% z* `0 D! z
不知道你的怎么就效果不好
0 G6 s& P3 \: ^% u考虑过培养箱的培养条件吗

POPOLD

7.2

huozhicb

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8 h, J2 j0 @' n* @3 g0 o
1 J1 D: T0 ?. L1 P$ n小鼠的谢谢支持

huozhicb

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" w6 i8 o; N/ L) Q: k5 j
1 k; M7 `5 l  e6 q  b8 K+ e# P4 \% N谢谢您支持！我们的培养箱是新买的，买的时候校准过：37℃、5%五九高纯二氧化碳、饱和湿度。& D- D) O* z0 t
我想问一下，你们的pH时按照《小鼠胚胎操作手册》上的方法，先充气平衡然后测pH吗？
2 B. M8 t- V: z- g我们这里没有充气的装置，所以直接用pH计调的pH。感觉靠酚红的颜色标定有迷惑性：加了BSA之后培养液的颜色都偏黄。
' E# m3 r2 Q: s3 I

jhu132llh

回复 huozhicb 的帖子0 q* x1 _0 G# o

$ Z% z2 v# i; `先充气平衡然后测pH是要更加准确0 ~! D! R* A# E( z2 ^, d
但是一般情况下我们也不这样做" j) C, g" X6 [* O# k
太麻烦了
( y2 |  _5 `' d) I1 l* b) J- l! R都是直接用pH计调的pH
! B/ e7 N5 G6 W/ `" a' W# a4 v& h. p是的
" e) P  `$ J2 _4 p. }; L加了BSA之后培养液的颜色是偏黄的
9 r; {3 T0 `& R$ P但是只要PH值对了就OK了，一般在PH校准后在培养箱中CO2对PH的影响不大的" @. _0 ~1 A. J# E5 Y/ Z
不影响细胞的正常生长的
- X% \5 Y( d0 f3 |! x4 M! B只是颜色是确实有点欺骗性8 r  d8 G3 [! ?
需要及时换液

huozhicb

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4 K8 n5 @. S* B2 {  a8 l; M" ~/ r" F- V- K9 @& a$ y
谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！
- l" H4 ]5 O. c% H0 ?7 u9 G  D) P9 M4 ~" W
之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？; o& c) K5 r* m8 `/ g( q$ t
; {  ]: M! _& p. Q$ ?& W
我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？
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麻烦版主大哥了，谢谢！

huozhicb

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% }, i2 O1 d- ~谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！  G$ O9 _2 h. n+ p$ j3 ]1 F
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之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？
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& p. H/ `$ P- J/ Z" T+ H4 F我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？
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  O" E5 u  H3 l  E5 G4 }" r9 `麻烦版主大哥了，谢谢！