体外受精培养液的pH各是多少！

huozhicb

给位大虾，小弟摸索了好长时间的IVF但是效果一直不好，换了很多培养系统（HTF/KSOM-AA、mKSOM/KSOM、T6/CZB）都不稳定，找了一些原因，发现各方面的资料里，对于IVF过程中使用的各培养液的pH描述得很少（也许是小弟不才，没有查到一手资料），请各位专家指点。麻烦大家把自己使用过的系统和每一过程使用的培养液的pH晒一下吧，谢谢！; s! `5 e) q  S6 h$ I3 R$ [( `
我配好各种培养液之后，将所有培养液都调pH至7.4左右，使用前12h做成小滴，用矿物油覆盖，放入培养箱平衡。

帕帕拉

你做的什么动物？

帕帕拉

你做的什么动物？

jhu132llh

都是7.4的6 u& G; c7 a: i& s0 I( |/ I
一直也没问题的+ ^1 p3 e- Q5 B# p0 S# \
不知道你的怎么就效果不好
, `) H5 i" S+ ^& _+ V6 ~' }( ^考虑过培养箱的培养条件吗

POPOLD

7.2

huozhicb

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1 N3 E" A$ g9 {" l8 a$ d3 V" v3 R! \7 b
小鼠的谢谢支持

huozhicb

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. s' G: K& o* M4 n
0 s/ g# I3 `& W9 v3 m" I$ _# w谢谢您支持！我们的培养箱是新买的，买的时候校准过：37℃、5%五九高纯二氧化碳、饱和湿度。
( R) B2 N+ F4 P& Y1 G我想问一下，你们的pH时按照《小鼠胚胎操作手册》上的方法，先充气平衡然后测pH吗？
4 ]# P' k# u, A6 z! r我们这里没有充气的装置，所以直接用pH计调的pH。感觉靠酚红的颜色标定有迷惑性：加了BSA之后培养液的颜色都偏黄。0 F( A/ e, z, l# N* @2 s3 x9 y

jhu132llh

回复 huozhicb 的帖子5 y& t5 x* q1 p
1 `3 t$ k! b, _, B
先充气平衡然后测pH是要更加准确& C* E; s) _4 G  }1 q. w
但是一般情况下我们也不这样做
- D, E# s" t0 N5 `, u太麻烦了
8 ?1 b% P6 g" B0 c+ Z) c" v都是直接用pH计调的pH# t) C. B/ [: |9 G% k: o8 ~8 ]% J: ]2 D
是的5 Q3 ]; l" v, ~6 f0 ]) B( W
加了BSA之后培养液的颜色是偏黄的6 |# o( W* d) \6 v( U% X8 Z6 _
但是只要PH值对了就OK了，一般在PH校准后在培养箱中CO2对PH的影响不大的$ W! ?& Y$ \' @# ~" H+ x+ g
不影响细胞的正常生长的' H4 r1 s4 P- v6 k9 P  i) x9 A
只是颜色是确实有点欺骗性
, p7 S, i( n, m; M4 J需要及时换液

huozhicb

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- M# `4 C6 V3 e& n: u- k0 A' P- S; C- @% z5 C7 y
谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！5 P* W  i  V6 J  a2 d0 ?' L
. F: U9 a7 r+ @3 L6 v1 }
之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？
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% T' W6 k+ i) ]1 F% C1 s1 e我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？
1 y4 L) b( G+ T$ q1 D) n% x$ u6 ~
麻烦版主大哥了，谢谢！

huozhicb

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7 z: Z8 i* L. h
0 U0 |: k+ `2 ]( L) I谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！
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之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？( j# h( F) [  a1 f" ~/ R- K) U
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我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？
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3 n2 m. h% K, p+ r3 }麻烦版主大哥了，谢谢！