ips全军覆没，我该怎么办？

rongrong

回复 张也行 的帖子6 y3 A  T$ r" C9 b+ e* v
" P) c% \' M7 c, n  P, o
恩，算是几个细胞的小集落，但是边缘没有那么明显的界限，估计都不行了，我现在想起要养干细胞手都抖，不知道怎么来呵护它，他就会好好的。。。唉1

rongrong

回复 Yedan 的帖子: I1 M. v# a! c6 l9 ^

  M8 U" V0 O2 v:'(我是用胶原酶消化的，然后复苏时要洗几遍，不断吹洗，离心，反正就成那了，我也不知道，没有吹很多次的

张也行

回复 rongrong 的帖子* S1 y! _+ U4 U6 m

9 d2 T2 Z( \* G9 Z我觉得是因为你复苏时吹打太剧烈造成的。你是高手，应该明白人的ES和iPS传代时都是传的小集落而不是单细胞，吹打的过于剧烈，小集落不容易生存，更何况是复苏的时候呢。4 b% P0 ]2 @$ @) p
: |! A- t% P4 Y" S1 P$ f+ n( v- K+ ~4 e. v
很奇怪你怎么知道贴壁的是单细胞呢？人的ES或iPS细胞单细胞应该很难成活吧，应该是几个细胞形成的小集落吧。

Yedan

回复 jefferson 的帖子
5 U- m/ ?$ c* K- E' I6 v/ d. O- X3 q/ ?" d5 Y
应其龙的2i不是用在mES的Feeder-free的culture吗，在复苏的时候有用吗？求reference

Yedan

回复 rongrong 的帖子
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其实一开始我还猜测LZ你养的是小鼠的ips呢……) [3 |: V, w1 Z3 W& [# Z2 D
你养的是人的ips，为什么会是单细胞？我们实验室都是用针划了传代的，不会消化成单细胞的，再说人的干细胞不能像小鼠那样打成单细胞的，养不活的……7 t3 b8 V' M( @2 p1 r: N0 Z5 |0 ?/ ~- H

Yedan

回复 oucflora 的帖子
2 H/ ?: C# `& S# }: l. Y; T3 k" k' B
您不是说LZ的10%DMSO浓度低了吗，所以我想请问您冻的时候用多少浓度，还有reference是什么。至于DMSO的作用就不用您解释了……

dilal

人的iPS细胞生长本来就很慢，既然有贴壁的细胞，为何不继续培养培养，看能否长起来。我们前一段时间买回来的miPS细胞也出现了这种情况，幸亏细胞收到后我们冻存了5管。传完代以后细胞大量漂浮，而且成团状，下面也有少量的细胞贴壁，换完液第二天同样出现相似情况。见帖子http://www.stemcell8.cn/thread-44333-1-1.html
9 v7 _$ b5 ?# O; |3 ?2 Z+ M" R( ^当时怀疑是饲养层被支原体污染了，所以将细胞全扔了，剩下的冻存细胞一直没敢再养。最近一直在拿mESC摸索合适的培养条件。建议楼主暂时停下来，找到原因了再去养，查查是否有支原体污染或其它污染？

rongrong

回复 oucflora 的帖子3 a: W! C( ~( M

5 N, A$ ~4 x& I$ P4 U还有那你们一般DMSO浓度到底用多大啊？

rongrong

回复 Yedan 的帖子
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* Q) A1 }, h" A, X是人的，800转看起来是全部离下来了，我听别人说他们都是静止放5分钟就好，主要我得细胞都变成单细胞了，不再像以前那样一个个克隆了，总是离心，吹打这样不会影响细胞的存活吗？再说刚复苏的细胞这样折腾能行吗？我就是想看看大家都是怎么复苏的？

rongrong

回复 evial 的帖子3 Y+ D5 r! ~9 H% w$ F/ n! O

' J" T1 `2 D0 J7 O6 S英文版是啥啊？我是新手，好多东西费了包包但是不能下载啊