MSC 冻存问题

andylee824

好的，谢谢各位楼主。你们提供的方法我都做个试验看看

menghy

7 b) n3 l) j. S& e
. X! K; T+ L" H7 u3 S
楼主应将更详细的复苏步骤写出来更好分析一些。3楼的回复其实已经很详细了，我个人认为用10％的DMSO＋20－30％FBS＋培养基就可以达到很好的冻存效果，在复苏后效率也能达到85－90％了。为什么要用90％的FBS呢？还有就是在冻存的时候选取的细胞根据你培养的周期在对数生长期是最好的，细胞密度太大，就会发生接触性抑制，细胞停止了增殖，这个时候冻存的细胞复苏后效率就会降低。

hwlightning

用完全培养基就是1:3:6

hwlightning

10%的DMSO、40%胎牛血清、50%培养基（我是用的低糖DMEM）
4 {! W# u) m( r: u4摄氏度放40分钟、零下20度放30分钟、再放零下80度、放24H就可以放液氮罐保存了
- x" N7 k* G, T$ S- Q$ I) Q一般就放-80度保存
* v0 I! t. n) f; k9 i3 a8 a如果有程序降温盒就省事了，直接零下80( X* b1 _! n3 A3 l
复苏效果很好
9 C* j( s& J* _1 \' B冻存的细胞融合度80%左右吧！
' Y5 d% H7 {$ _& R$ V如果冻存细胞多要先把冻存液配好放四度冰箱，因为DMSO放热，刚加进去和容易损伤细胞，常温DMSO对细胞毒性也大。
6 q3 a9 [, e% L+ B* j复苏细胞我用的42度水浴，速度要快，不能有冰晶。  G- S, F, ~  s2 P: l
取细胞加入准备好的20ml培养基中，离心。重悬，培养
9 p% z2 @$ i+ y1 y8 B$ w  {希望能对你有帮助

tjutiger

复苏的存活率70%有些低，拿贴壁的就更少了。可能与你冻存的步骤，与复苏的步骤有关，基本原则是慢冻快苏。