RNA提取出来了，2次2种方法，但电泳都没有条带，抓狂~~

gh2010

1 Q1 \" l0 R- |' G* ~% W" m

- p% c6 Y/ K$ W& o$ X  k1 y细胞数比较少，大概1,000-10,000，第一次是用试剂盒提的,A260=0.308，A280=0.213，A260、A280=1.45，第二次直接用通用的方法（Trizol,氯仿），A260=4.143，A280=2.399，A260/A280=1.73，两次电泳都没有条带（一个样品5ul），最大曝光都没有，是RNA降解了还是因为浓度太低？两次浓度测定都是用的同一台nanodrop....

gh2010

大家知道的给说一下吧

星移龙一

你最后洗脱用的是多少水？还有，测得浓度呢，怎么就只有OD值，没有浓度啊？？？

langziforever

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% e3 ]: s6 c& g/ w0 `
/ x6 P) {5 x* P你可能需要说一下具体的操作或则操作是否有什么现象可循，没有条带有很多种原因，也不排除你跑电泳时的问题，不过看你的A260/A280那么小，估计里面蛋白污染严重，所以，你的提取过程肯定是有问题，比如抽提过程等等！

yewangocean

这种情况多半实验过程有个步骤出问题了，造成污染降解之类的。依据你的描述很难判断问题出在哪一个步骤。建议个个排除疑点。

564490565

A260/A280这么低，应该有蛋白污染。说明提取过程有问题，RNA很有可能降解了。电泳没有条带是指什么都没有，还是没有特征条带但存在弥散现象？

yuyuzhiming

细胞数量根据protocol的要求去准备，感觉上你的细胞数量不够多。. b" _+ y4 `+ M
可以采用QIAGEN公司的试剂盒提取细胞RNA。价格比较贵，但是相对来说质量好，实验效率高。- {+ e1 {- V: I
nanodrop测定的时候，A260/A280=在0.8-2.0之间比较好。A260/A230=在0.8-2.0之间比较好。
# }0 ]7 y' C  k& ]A260表示RNA浓度。A280表示蛋白质浓度，A230表示盐值浓度。
" }4 Q9 K4 h4 ~; v1 u- V. L再试试看吧。RNA提不好很正常，不必大惊小怪。/ G5 _% r5 ]6 V: ?# a+ m

金戈

提RNA 要注意细节。细节不注意提取的RNA很容易降解了。

jj.jianjia

回复 yuyuzhiming 的帖子. s$ _; b7 J4 d3 c, I

: ~, w. D: H- }% D. S1.8-2.0吧？

yuyuzhiming

jj.jianjia 发表于 2011-10-4 05:25 7 [# o# V+ p( y+ d/ w. q+ i
回复 yuyuzhiming 的帖子! U8 K: m6 }% w1 u3 Q, N  [7 g

9 f; W% ?; ^) L0 y. ^) d2 \8 s; G9 p9 q1.8-2.0吧？

6 @) e! ~: P- ?5 g4 Y
对的。呵呵。写错了。不好意思。