求教：成纤维细胞原代状态不好的原因

牙牙丫丫123

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我养的是猪的胎儿成纤维洗吧，原代培养方法是0.25%胰酶消化，终止离心后接种，10%FBS的培养液，原来用这种方法培养细胞生长很好，可是这次培养时，第二天细胞长出来就特别老，而且细胞全是小黑点，请问这是什么原因造成的……是血清或者培养液PH值的问题吗？
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wangshumin12311

这细胞救不回来了，，，重新来过，，，看有没有支原体或者细胞受啥罪了，，，血清正常的话不会出现这情况，，，，话说你是哪个单位，，，做猪的？

牙牙丫丫123

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2 h5 Y; K, `6 T/ v. ]8 x; V( M
! y) j/ n  G; ?, Y您觉得这更像是支原体污染？我是东北农业大学的，我们实验的主攻方向是猪

军医

是不是抗生素加多了？

星移龙一

我们实验猪的用的都是15%~20%的FBS，原代都很好啊，传代生长也很好，不知是不是这个问题。

牙牙丫丫123

回复 军医 的帖子" ]* v, k0 T' W0 |) P( X5 c* U
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我加的正常抗生素用量

牙牙丫丫123

回复 星移龙一 的帖子5 O, Q  G) {' y5 h/ y
( Q  w0 B' J: P( H
能请问一下您是怎么做原代细胞培养吗？" N. `/ o9 _  c7 T7 Z- f' \/ _- H

牙牙丫丫123

回复 星移龙一 的帖子4 t, d6 N3 B/ ?

  \: F. U# B0 P还有，我这次使用的是10%的培养液，有没有可能是血清质量本身不好，然后再加上血清浓度低，导致细胞营养不良呀……然后细胞就长成这样了, ]1 B" Y. l! Y" O; [' E" X9 t

军医

回复 牙牙丫丫123 的帖子. l# A9 P) K( J7 Q: Y% |8 l/ T4 @& A

5 |* S; g* N. H$ H  R/ C9 w( |' {8 S我们用10%的血清养原代也挺好的，是不是时间长了，迁出的细胞长的太密了，生长抑制了

星移龙一

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胎儿的取部分组织，剪碎后涂板培养，+ k& g) s7 k; V
成体的一般是耳源的，将毛刮去后，剪碎涂板。