逆转录病毒在293T细胞中包装，一般多少时间收病毒啊？

刘森泉

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4 D2 u7 Q) I8 `  h" L: ]' }
逆转录病毒在293T细胞中包装，一般多少时间收病毒啊？已经两天了，293T细胞看起来状态已经不行了，可是我的备转染细胞还没长好啊！能不能放到第三天再收病毒转染啊，还是需要今天收病毒，冻存起来？冻存对病毒滴度影响很大吗？谢谢！

shylook

状态都会不好的3 L! s# n% ~- B% j
培养基黄了也不要去理会! F' |9 d# w, `/ Z! c

0 g& D: {# Q  [一般转染之后48h收 有时也40h收* t" B$ S4 q0 [$ d5 `8 w
很多protocol24h  48h分别收一次
. m4 c/ K& D/ U7 m! |0 w2 I
7 s! v" Z; A+ }5 p1 F: O8 D3 r个人觉得48h收足够
! j. O4 m9 F( J- [
- m. g" X, O0 @6 E你可以冻起来（分装）也可以放4度几天再测滴度9 t& K" D! H$ P8 L: p
本人是分装-80

lemma710

48h 72h收病毒，分开放，等测了滴度在决定要不要混起来。
/ g7 c6 r. g6 |1 P病毒你可以先收了，放在4度，一两天是没有问题的，以后放最好分装放在-80。
# t) M3 T4 a7 s: v% X3 }7 O& h1 }-80是会降低一些病毒活性的，但长时间放4度降低的更多的~

刘森泉

谢谢各位哈。

yangpan521

我们这一师兄将病毒液放入了 -80度，被老师骂了一顿，老师说病毒液不能存放，应现收先用。如果细胞没备好，就把病毒液扔了 。请求说法

tianlanghehb

72h收是没有问题的，保存一般都是放-80度。

shylook

yangpan521 发表于 2011-10-29 10:05
& F, V" U$ B9 Y6 f% s) }我们这一师兄将病毒液放入了 -80度，被老师骂了一顿，老师说病毒液不能存放，应现收先用。如果细胞没备好， ...

. a9 h, {" _5 W, X1 U) r9 m* G只能说你老师比较死板1 Y- t( P( j; ?$ ?* l) z3 k( q
平时包的话 转染48h收3 J9 \+ p2 G  R3 V  ^. t6 S' u8 c
转染后加15ml DMEM
, S9 X; T$ s" Z" j3 p" f收的时候能收14ml
& S' T/ H7 I; q4 A$ e分装1ml/每管
9 I2 C$ J0 U' P! w-80保存8 ^) z$ i* C( k- r, ]
半年以上5 i! U9 z, y% G! g, ]5 r
感染10cm dish 只用1ml病毒
) m" b& y3 Y# _* K( _% h4 Ipuro筛时 感染效率90%以上

guo6259

很负责的说是48h和72h各一次。但关键是保证293T在转染时是70%融合的。要不72小时就长的太密了。
) d/ @3 J  H7 K% y' n293T是关键！！5 a' _. Z: Z! g1 ^# @; ]# C
至于收 的病毒-4度放一个星期也没什么问题。

王乾

病毒液一般转染完8-12小时换液，一般12小时就已经有病毒产生了，收病毒的时间一般是换完液36-48小时，也有人推荐36小时收一次，72小时再收一次混在一起用。另外病毒是可以冻存的，一般是液氮速冻，溶的时候好像速溶和慢溶都行，我测过冻前和冻后的滴度区别，一般冻融一次滴度会降低为原来的一半。病毒感染一般的细胞滴度一般不是问题，但感染ES滴度就不要太低，怎么也得10的6次方吧。

rexhz

你们的慢病毒都是用原液做吗？有做慢病毒浓缩的没有?