逆转录病毒在293T细胞中包装，一般多少时间收病毒啊？

刘森泉

' r# ]) }$ F: V7 C1 r) s' b. _& b/ G1 j% W) c2 o! b
逆转录病毒在293T细胞中包装，一般多少时间收病毒啊？已经两天了，293T细胞看起来状态已经不行了，可是我的备转染细胞还没长好啊！能不能放到第三天再收病毒转染啊，还是需要今天收病毒，冻存起来？冻存对病毒滴度影响很大吗？谢谢！

shylook

状态都会不好的
" |, T; Z' A4 N" `# F! U* ?0 K培养基黄了也不要去理会
& z7 B" M5 p$ b2 n0 V: E; j
2 _* g3 J# R. @5 K1 D9 z# b6 ^一般转染之后48h收 有时也40h收
) u/ j# ]7 |$ ~7 W很多protocol24h  48h分别收一次
; ?3 g+ g0 [, g# _, y/ m5 c4 d; n/ q  G2 o" d* X( V# h! Z
个人觉得48h收足够
) z* n/ |, A+ {& \1 e9 T0 M  D; C. W% B/ d2 G* q( ]7 |% Y
你可以冻起来（分装）也可以放4度几天再测滴度
6 p, L( \* j2 G本人是分装-80

lemma710

48h 72h收病毒，分开放，等测了滴度在决定要不要混起来。- B# M! t0 h( v7 V
病毒你可以先收了，放在4度，一两天是没有问题的，以后放最好分装放在-80。
6 P# a) q2 i) B* ]! ~* ?-80是会降低一些病毒活性的，但长时间放4度降低的更多的~

刘森泉

谢谢各位哈。

yangpan521

我们这一师兄将病毒液放入了 -80度，被老师骂了一顿，老师说病毒液不能存放，应现收先用。如果细胞没备好，就把病毒液扔了 。请求说法

tianlanghehb

72h收是没有问题的，保存一般都是放-80度。

shylook

yangpan521 发表于 2011-10-29 10:05 6 E/ o8 G: E1 f& s( G; L8 \, e
我们这一师兄将病毒液放入了 -80度，被老师骂了一顿，老师说病毒液不能存放，应现收先用。如果细胞没备好， ...

$ [0 X: l3 _& d! P: N( V0 ^
只能说你老师比较死板
' L1 I+ I3 R3 V( y平时包的话 转染48h收7 S4 d) i/ p+ u0 b8 t0 ~& K
转染后加15ml DMEM+ d4 w0 y' j( x8 x3 E9 H3 b
收的时候能收14ml ( @. t3 J6 j6 |4 C, |: [
分装1ml/每管' N5 u: t2 R1 R7 d4 `
-80保存
5 q7 q3 N' i' g半年以上
3 H) V( S! x- l  |感染10cm dish 只用1ml病毒
) @  D9 m; o4 J% H' |% Npuro筛时 感染效率90%以上

guo6259

很负责的说是48h和72h各一次。但关键是保证293T在转染时是70%融合的。要不72小时就长的太密了。# g( u6 |2 n0 O! I
293T是关键！！
5 W% i' Z' g: s/ ~0 f: f至于收 的病毒-4度放一个星期也没什么问题。

王乾

病毒液一般转染完8-12小时换液，一般12小时就已经有病毒产生了，收病毒的时间一般是换完液36-48小时，也有人推荐36小时收一次，72小时再收一次混在一起用。另外病毒是可以冻存的，一般是液氮速冻，溶的时候好像速溶和慢溶都行，我测过冻前和冻后的滴度区别，一般冻融一次滴度会降低为原来的一半。病毒感染一般的细胞滴度一般不是问题，但感染ES滴度就不要太低，怎么也得10的6次方吧。

rexhz

你们的慢病毒都是用原液做吗？有做慢病毒浓缩的没有?